TNF- o诱导细脂m亡过渭中与PAI-2相互作用的蛋白质的研究.pdf

倾卜学位论文诱导细脂亡过渭中与胡白解咒, 摘要
诱导细胞凋亡过程中
与相互作用的蛋白质的研究
摘要
型纤溶酶原激活物抑制剂是
丝氨酸蛋白酶抑制物超家族的成员,作为一
种多功能蛋白质,除了参与调节纤溶活性、免疫系统发育、感染、肿瘤浸
润和迁移等生理和病理过程外,还能参与调节等诱导的细胞凋亡,但对
如何抑制肿瘤坏死因子诱导细胞凋亡
的分子生物学机制还不是很清楚。己有的一些研究结果均表明对细胞凋亡
的抑制作用与受体及无关,最新的一些研究结果也已排除
作为肤冬肤酶的底物参与凋亡调节的可能性,但它抑制细胞
凋亡的功能却仍然依赖于其丝氨酸蛋白酶抑制物的活性,需要其螺旋间区的
蛋白质结合域,需要组织型转谷氨酞胺酶的介导。
分子中的螺旋间区是与其他蛋白质相互作用的结构域,而
的这段螺旋间区在抑制。诱导细胞凋亡的过程中发挥重要
作用,为了研究诱导细胞凋亡过程中,有那些蛋白质通过该螺旋间
区与相互作用,以及这些相互作用对抑制细胞凋亡功能的影响,首
先要确定具体有哪些蛋白质可能与螺旋间区相互作用,因此我们课题
组构建了凋亡过程中的细胞。文库,并以这段螺旋间区为
诱饵,利用酵母双杂交系统筛选与相互作用的蛋白质。在
营养缺失的选择性培养基上,共长出个酵母克隆。经
过进一步检测半乳糖营酶活性,获得个阳性克隆,去除具有独立转录活性
的克隆,最终获得个能与螺旋间区相互作用的阳性克隆。将这些
序列测定结果提交进行同源性分析,发现有种已知蛋白质能与
相互作用,其中包括
在此基础上,我们主要对和进行了进一步的研究。通过
我们获得了全长,进一步的实验证实,与
确实存在相互作用。实验结果中,及其缺失突变体的条带仅出
现在人约和处,并没有发现有分子量较大的一即泛素化的
,或分子量较小的一即己被分解的条带。
倾卜学位论文导细卿理中与褶互毋必蛋日质摘要
另外我们也获得了梭基端的部分序列,进一步用免疫共沉淀的实验
证实,与在细胞内确实存在相互作用。这种相互作用无需
的信号促发,在细胞核内外都可以发生。正常情况下,大部分的
存在于细胞核内,并且在此发挥其作用,而胞内型在细胞内分布均匀,没
有明显的细胞核和细胞浆的差异,而在的序列上也没有保守的核定位序列
,为了更清楚的研究两者之的关系,我们课
题组构建了在的矮基末端加上一个由个氨基酸
组成的核定位序列,与真核表达载体重组,构建绿色荧
光蛋白与入核突变体融合蛋白表达质粒。转染细胞,荧光显微镜下
比较野生型与的入核突变体在细胞内分布的差异。结果提示
在核定位序列的引导下,几乎所有的都进入了细胞核,而野生型则
弥散分布于细胞内。但是这种分布的改变对细胞的生存并没有影响,另外,
当用诱导细胞凋亡时,野生型在细胞内的分布没有发
生明显的改变,另外当被定位于细胞核内时,丧失其抗凋亡的功能,这些
结果提示我们,与之间的相互作用可能与。诱导的细胞凋亡
没有特异性的关系。
综上所述,通过本次研究我们找到了一些能与相互作用的蛋白质,并
从与蛋白质之间的相互作用、与蛋白质末端之间
的相互作用、凋亡前后在细胞内的定位这三个方面对抑制诱
导的细胞凋亡的分子机制进行了初步的研究。
关键词纤溶酶原激活剂抑制物型肿瘤坏死因子一。细胞凋亡酵母双杂
交免疫共沉淀核定位序列
硕学位论文评早细卿岌功与放互摘要


















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倾卜学位论文细施卿亡理窟沪与介第一部分
第一部分
细胞凋亡过程中与相互作用蛋白质的筛选