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文档介绍
第六章分子生物学技术
内容
1、核酸提取与鉴定
2、印迹杂交技术
3、聚合酶链反应
4、重组DNA技术
5、转基因技术与基因打靶
核酸提取与鉴定
研究对象:基因组DNA、质粒DNA、总RNA、mRNA等
第一节核酸提取
总原则:
保证核酸一级结构的完整性
避免杂质污染
核酸提取的主要步骤:
破碎细胞
提取
纯化
——内容物释放
、纯化
,并去除杂质
核酸提取过程
一、质粒DNA
质粒(Plasmid)是游离于细菌(及个别真核细胞)染色体DNA之外、能自主复制的遗传物质
多数是一种闭环DNA,大小为1-300kb,能够转化细菌,是基因载体
提取质粒DNA包括三个基本步骤
3·分离纯化质粒
关键:除去染色体DNA
质粒DNA特性:
①相对较小(%-2%)
②闭环(染色体DNA大量断裂并且呈线性结构)
提取方法:***化铯密度梯度分离法、碱裂解法、煮沸裂解法等
(1)***化铯密度梯度分离法
EB分子可嵌入相邻碱基对之间,使DNA解旋
开环DNA或线性DNA存在游离末端易于解旋,可结合大量EB,DNA-EB复合物含EB越多,密度越小
闭环质粒DNA没有游离末端,不易解旋,结合少量EB,密度较大
在饱和EB条件下,质粒DNA密度比断裂染色体DNA密度大,经***化铯密度梯度离心,可分离提取质粒DNA
内容
1、核酸提取与鉴定
2、印迹杂交技术
3、聚合酶链反应
4、重组DNA技术
5、转基因技术与基因打靶
核酸提取与鉴定
研究对象:基因组DNA、质粒DNA、总RNA、mRNA等
第一节核酸提取
总原则:
保证核酸一级结构的完整性
避免杂质污染
核酸提取的主要步骤:
破碎细胞
提取
纯化
——内容物释放
、纯化
,并去除杂质
核酸提取过程
一、质粒DNA
质粒(Plasmid)是游离于细菌(及个别真核细胞)染色体DNA之外、能自主复制的遗传物质
多数是一种闭环DNA,大小为1-300kb,能够转化细菌,是基因载体
提取质粒DNA包括三个基本步骤
3·分离纯化质粒
关键:除去染色体DNA
质粒DNA特性:
①相对较小(%-2%)
②闭环(染色体DNA大量断裂并且呈线性结构)
提取方法:***化铯密度梯度分离法、碱裂解法、煮沸裂解法等
(1)***化铯密度梯度分离法
EB分子可嵌入相邻碱基对之间,使DNA解旋
开环DNA或线性DNA存在游离末端易于解旋,可结合大量EB,DNA-EB复合物含EB越多,密度越小
闭环质粒DNA没有游离末端,不易解旋,结合少量EB,密度较大
在饱和EB条件下,质粒DNA密度比断裂染色体DNA密度大,经***化铯密度梯度离心,可分离提取质粒DNA
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