舌发育异常与胎鼠地塞米松腭裂的关系.doc

舌发育异常与胎鼠地塞米松腭裂的关系
【摘要】目的:本实验通过小鼠胚胎腭裂模型制备,探讨地塞米松对胎鼠舌体高度、宽度及舌肌黏膜厚度的影响。方法:选取孕鼠30只,随机分为对照组和实验组,,对照组注射等量生理盐水。~,取其头部Bouins液固定,石蜡包埋,标准颅颌冠状位5μm连续切片,进行HE染色和bcl2免疫组化染色。光镜下进行形态学测量并对所得数据进行统计学分析。结果:2阳性信号呈棕褐色颗粒,存在于核膜周围及胞浆中。、对照组中不同时期横行舌肌与纵行舌肌数量比例不同,,、垂直舌肌数量较多。,实验组舌体高度明显高于对照组。结论:地塞米松诱导的胎鼠腭裂的发生与舌发育异常有关,而且舌体高度在一定程度上参与了腭裂的形成过程。
【关键词】腭裂;小鼠;地塞米松;舌肌;bcl2
小鼠腭裂的形成受多方面因素的影响,其中胎鼠腭发育的异常、舌发育的异常等均参与了腭裂的形成过程。其中胎鼠腭发育的异常我们已研究过[1,2],本实验重点探讨舌的发育过程及其发育异常对腭裂形成的影响。
1 材料与方法
实验试剂与器械
试剂:醋酸地塞米松、Bouins固定液、苏木精—伊红染液、兔bcl
2多克隆抗体、即用型SABC免疫组化试剂盒(武汉博士德生物有限公司)。
仪器:OLYNPUS CX31,Motic 。
实验动物与方法
健康成年未生育昆明小鼠,体重22~25g,北京大学医学部实验动物中心提供,下午6∶00雌雄2∶1合笼,次日早7∶30和下午4∶30检查阴栓,发现阴栓之日定为孕期第0天(0GD,gestation day)。所得孕鼠随机分为实验组、对照组。,对照组注射等量生理盐水。、、、,取出胚胎,共得到胎鼠284只,其中实验组196只,对照组98只。取头Bouin's液固定,以喙部向下做定向石蜡包埋、5μm连续冠状位切片。
染色
HE染色:二甲苯脱蜡、梯度酒精、蒸馏水洗。苏木精染色5min、盐酸—酒精分化、伊红染色2min、梯度酒精脱水、二甲苯透明、封片。
免疫组化染色:常规脱蜡至水;抗原修复3min; PBS液洗3min×3次;3%H2O2 室温避光孵育15min; PBS液洗3min×3次;5%BSA封闭。加入bcl2(1∶100),湿盒中4℃孵育过夜。其他步骤按即用型SABC免疫组化试剂盒使用说明书进行。苏木精复染,盐酸—酒精分化、蓝化、脱水、透明、封片。光镜观察舌体高度、舌体宽度及舌黏膜厚度的变化。
数据处理
用OLYMPUSCX31显微镜连接在计算机上进行观察:各组中每只动物随机选取同一解剖平面,10倍目镜下统计测量舌体高度、舌体宽度及舌黏膜厚度,以SPSS统计软件进行ANOVA方差分析。
2 结果
舌体的形态学观察
舌由表面的黏膜和深部的舌肌组成。舌肌由纵行、横行及垂直走向的骨骼肌纤维束交织构成,纵行肌所占比例