正常血细胞形态观察.doc

血液病检验技术实验指导
实验一、活化凝血时间测定
【实验原理】同试管法CT测定。试验中加入白陶土-脑磷脂的悬液以充分激活因子Ⅻ和Ⅺ,并为凝血反应提供丰富的催化表面,故称为活化凝血时间(ACT);还可以避免因接触激活阶段的不同结果带来的影响,从而提高了本试验的敏感性和重复性。
【试剂】
,故又称部分凝血活酶。***,放置2h后过滤,将此兔脑粉加***仿25ml,连续震荡2h,以滤纸过滤,滤液蒸发后为淡黄色蜡状物,刮入玻璃研钵中,加12ml生理盐水研磨成均匀乳剂,。
%白掏土悬液白陶土2g加入50ml生理盐水中,室温保存,用前摇动。
%白陶土-脑磷脂悬液将脑磷脂用巴比妥缓冲液作1:50稀释后,再加等量4%白陶土悬液混合而成。4οC可保存3天,用时充分混合。
、、,加蒸馏水至2000ml。,否则影响试验稳定性。
【操作方法】
%白陶土-,轻轻混匀。
。
【参考值】 ± (~)min。
【临床意义】
,但较其敏感,重复性也较好,可检出因子Ⅷ:C小于45%的亚临床型血友病。
。
实验二、血浆游离血红蛋白测定(邻一甲联苯***法)
【实验原理】邻一甲联苯***在酸性溶液中和过氧化氢与血红蛋白共同作用生成氧化型联苯***,产生绿色→蓝色→紫色,其颜色的深浅与血浆游离血红蛋白的含量呈正相关。
【试剂】
***溶液称取邻一甲联苯***,溶于冰醋酸60ml,加蒸馏水至100ml,置于棕色瓶内于冰箱保存,色变暗应重配。
%过氧化氢溶液用30%过氧化氢原液新鲜配制。
%冰醋酸溶液。取10ml冰醋酸,加蒸馏水至100ml。
备用。
100U/ml肝素于试管内,在80℃以下烘干,每管可抗凝2ml全血。
【操作方法】
。
,分别标明测定、标准和空白,分别加入血浆、应用标准液,再向
各管中分别加入邻一甲联苯***溶液及1%,充分混匀,放置10min。
%冰醋酸溶液10ml混匀,用435nm波长比色,以空白调“0”,读各管吸光度。
:
测定管吸光度
游离Hb( mg/L) = ________________________ ×100
标准管吸光度
【质量控制】
1. 一切容器均应避免血红蛋白污染,标本勿溶血,否则可引起假阳性。
2. 过氧化氢溶液浓度要准,新鲜配制。
3. 联苯***醋酸的含水量不能低于15%和超过30%,否则均可引起吸光度降低。
4. 标准液的加入量一定要准。
【参考区间】<40mg/L
【临床意义】血浆游离血红蛋白含量增加是血管内溶血的特征。血浆中血红蛋白含量超过与血清中结合珠蛋白的结合能力时,其含量即可升高。微血管内溶血时,血浆游离血红蛋白含量均明显升高。PNH为200~2500mg/L,输不合血型后为150~5000mg/L。温抗体型自身免疫性溶血性贫血、镰状细胞贫血及地中海贫血时血浆游离血红蛋白可轻度或中度增加。血管外溶血则正常。
实验三、血清结合珠蛋白测定(比色法)
【实验原理】血清结合珠蛋白(Hp)是肝脏产生的a2糖蛋白,它与游离的血红蛋白(Hb)具有特殊的亲合力,可形成稳定的Hb-Hp复合物,后者在弱酸性(pH4)条件下,具有过氧化物酶的活性,测其活性可间接反映Hp的含量。
【试剂】
(pH4) 称取乙酸钠(NaAC·3H2O),,加蒸馏水至500ml。
%(V/V)愈创木酚溶液取1ml愈创木酚溶液于500ml乙酸缓冲液中,加蒸馏水至1000ml。
%过氧化氢溶液临用前配制。
高铁血红蛋白液。
【操作方法】
,避免溶血。
,与等量高铁Hb 溶液混合。
,加入于已预温(25℃)的愈创木酚5ml溶液中, %过氧化氢,于25℃水浴内作用8min,注意避光。每份标本均应双份同时测