(林木育种学)第八章林木生物技术知识.ppt

第八章
生物技术与林木育种
一林木细胞工程
(一)概念
细胞工程:是指以细胞为单位,在体外进行培养、繁殖或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿加以改变,从而达到改良或创造新品种,加速繁育生物个体,或获得某种有用物质的过程。
细胞工程应用于育种时,主要利用染色体数目与结构变异以及基因突变等遗传变异类型。包括细胞融合与细胞突变体的筛选等。
(二)细胞培养与融合
1 原生质体分离
①材料的选择
②材料的预处理
预培养法
暗处理法
药物及添加物处理法
萎蔫处理法
更新培养基法
③原生质体分离
④原生质体的收集与纯化
⑤原生质体活力鉴定
2原生质体融合
1)原生体的融合过程:
①凝聚作用阶段,两个或两个以上的原生质体的质膜彼此靠近。
②在很小的局部区域质膜紧密粘连,两个原生质体之间的细胞质相互连接,或是出现桥。
③细胞质桥扩展,融合完成,形成球形的异核体或同核体。
2)原生质体融合主要方法:
聚乙二醇(PEG)融合法
电激融合法
2细胞突变体的产生
1)材料:
游离细胞
原生质体
小孢子
新鲜愈伤组织
2)体细胞变异类别
细胞内DNA重复复制
形成三极或多极纺锤体与产生非整倍体
染色体断裂和重组
类减数分裂现象
3)变异水平
染色体数目变异
染色体结构变异
基因突变等
4)突变体类型
抗病、除草剂、盐、抗生素等抗性突变体
雄性不育突变体
营养缺陷型突变体
产量、株型等性状突变体
3突变细胞的筛选方法
1)直接选择法:是指新的突变表型在选择条件下能够优先生长,或预期从感官上可以测定其它可见的差异。可分为正选择和负选择两种方式。
正选择:指在培养基中加入某种对正常细胞有毒害的化合物,使正常细胞不能生长而只有突变体才能生长,从而筛选出细胞突变体。
负选择:指用特定培养基使突变体细胞处于不能生长状态,而非突变细胞却可以正常生长,然后用汰选剂淘汰正常生长细胞,最后使突变细胞恢复生长并分离出来。