羊肚菌多糖提取分离条件的研究.doc

羊肚菌多糖提取分离条件的研究 .doc羊肚菌多糖提取分离条件的研究
羊肚菌又名羊肚菜、美味羊肚菌,隶属于子囊菌亚门(Asycotina)盘菌纲(Disycetes)盘菌目(Pezizales)羊肚菌科(Morchellaceae)羊肚菌属(Morchella),共有28种,在我国陕西、甘肃、青海等20多个省市都有着极为广泛的分布[1],且在世界多个国家有分布。羊肚菌多糖是羊肚菌主要的活性成分之一,具有抗肿瘤、抗菌、抗疲劳、增强免疫力等多种药理活性。有研究表明,羊肚菌多糖对小鼠肝脏损伤有明显的保护作用[2]。由此,提高羊肚菌多糖的提取率也是将其应用于工业生产的关键步骤。常规的羊肚菌多糖提取方法以热水浸提为主,贾氏等[3]研究发现,羊肚菌菌丝体多糖最佳的提取条件为:浸提温度90 ℃,浸提时间150 min,浸提次数2次,加水比1∶40。鉴于单纯热水浸提多糖的提取量有限,笔者在前人研究基础上进行了改进,研究超声及其酶法对多糖得率的影响,为工业生产提供必要的研究基础。
1 材料与方法
试药与仪器
[(Morchella esculenta (L.) Pers.)](Morchella elata),广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心提供。纤维素酶和果胶酶由Solarbio公司提供,标准葡聚糖Dextran T70为Pharmacia 公司产品,其余试剂均为国产分析纯。Labofuge 400R台式冷冻离心机(德国Heraeus),恒温培养箱(上海智城),RE-52旋转蒸发仪(上海青浦沪西),BP211D电子天平(德国Sartorius),MLS- 3750灭菌器(日本Sanyo)。
培养基及培养方法工程论文发表
斜面培养基:采用PDA培养基,含土豆10%、蔗糖3%、%、%、KH2PO4 %、MgSO4
·7H2O %,无菌接种后25 ℃培养7~10 d,4 ℃保存。
液体种子培养基:含蔗糖3%、%、%、MgSO4 %、KH2PO4 %;每瓶200 mL分装于500 mL三角瓶中,灭菌后从斜面培养基上接种,25 ℃摇床培养10~14 d,转速180 r/min。
发酵培养基:含蔗糖4%、NH4NO3 %、KH2PO4 %、MgSO4 %、%;每瓶200 mL分装于500 mL三角瓶中,灭菌后按2%接种量吸取摇床培养的种子培养液接种,25 ℃摇床培养10~14 d,转速180 r/min。
多糖提取
经过以上培养后得到的羊肚菌菌丝体经过干燥后用于多糖提取,本研究将羊肚菌菌丝体分别以超声、纤维素酶、果胶酶处理后进行多糖提取,并将结果与常规热水浸提加以比较,以获得优化多糖提取方式。
热水浸提
称取5 g干菌丝体,粉碎后加入40倍体积的去离子水,90 ℃,150 min,残渣重复浸提2次。合并上清液,过滤。在37 ℃条件下,上清液用旋转蒸发仪浓缩至适当体积并以ΦMolish反应;FeCl3反应;(CTAB)络合反应[5];硫酸-咔唑反应;I2-KI反应;同时在190~390 nm波长范围内对羊肚菌多糖进行扫描。
2 结果
粗多糖重量比较