干扰素α抗肝癌MHCC97细胞的分子机理研究.pdf

复旦大学
博士学位论文
97细胞的分子机理研究
姓名:吴伟忠
申请学位级别:博士
专业:肿瘤学
指导教师:刘康达
20040401
干扰素Ⅸ抗肝癌细胞的分子机理研究一、差异表达基因谱的检测:缁脆是从我所首次建立的原位歹雎实牡诙弧=昀从捎谡锪萍际醯奶岣吒伟┑纳媛室延兴纳疲手术切除是瘸人获得长期生存最蠢效的途径,但即使是根治性切除,其术转移。本课题中应用我所建立的细胞模型进一步探讨干扰索繁一部分:扰素饔糜贛赴办卟钜毂泶锘虻难芯原发性肝细胞癌伟是皿、非洲最为常见的恶性肿瘤之一,年平磁甑母捶⒙嗜愿叽ィィ虼私档透伟┦鹾蟾捶⒚萑兆R坡逝步提高肝癌治疗疗效的研究热点和难点之一。我们在前期的研究中发现干扰素程有一个薪的撬翳癌现象,主要表现为干扰素疆对О┫赴旧淼脑鲋同时我们在临床上也尝试瑟大裁墓、长疗筏子撬素锺治疗末惹翳癞悫者,班降低职┸哺捶⒂入翳癌移棱瘰鼹分子枫蘧,失于撬豢程掖碴儆枨唆桊缛锤捶和转移治疗的病例选择和疗效预测提供帮助。移植入肝癌高转移模型狣上分离、克隆获得的、并能在体外培养体系中长期生长和传代的一株高转移肝癌缀您撩。该细蕤株不仅操持了派发中文摘要均蓑发病人数约为万,在我匿因原发性黔瘀死亡的瘸铡已占恶羧鼹瘤咒明显影响而主要是抑制移植瘤肿瘤血管的形成。‘藐素攫撬释番矾聃譬,麴麓静势予辊理醣究鞲±谚文疗
性肝细胞癌的某些特性如表达和分泌⑶以诼闶筇迥谙允二、差异表达基因的验证:选择条差异表达基因,┤烁伟└捶⒂胱R剖笛樾愿稍ぱ芯其中有趸虻淖B蓟钚允芨扇潘豵的作用而发生编码与细胞形态发生、粘附、运动和细胞骨架重塑相关蛋白的基原加工、生长因子和抗病毒相关蛋白的基因;目前功能尚未知蛋白的编码基因;表明干扰素訫赴淖饔檬嵌喾矫娴摹检测中表现为下调,而在半定检测中无明显变化,另一条基因⋯测中表现为下调,、理想的体外细胞模型。本课题首先应用高通量技术检测了在/干扰素饔们昂驧赴虮泶锲椎母谋洹结果发现:在受检的条人类己知基因中,共发现趸虻谋泶受干扰素仪调节,下调,另条基因的转录活性受干扰素的作用而发生上调。这些差异表达基因按功能可大致分为以下九类:编码与细胞物质和能量代谢相关蛋白和酶的基因;编码与细胞增殖、分化及凋亡等功能相关蛋白的基编码与细胞信号传导分子及其相关调节蛋白的基因;编码与血管形成相关蛋白的基因;编码转录因子蛋白的基因;、蛋白加工、分泌及蛋白降解功能相关蛋白的基因;编码与抗技术对的检测结果进行验证。在被选的条基因中验证符合率为%渲杏幸惶趸颉璄的表达在量和冢甤检因;因:和
/一,痬扇潘丌訫赴纳の尴灾跋臁检测中没有变化。上述两条基因在三种检测方法中不同表达的确切原因目技术是一种了解细胞基因表达改变的较好的筛选方法,为进一步研究提供第二部分:细胞抵抗干扰素鲋骋种谱饔玫姆肿踊硌芯往往同时启动一条或多条细胞内信号传导通路。从第一部分的细胞抵抗干扰素增殖抑制效应分子机理的研究主要集中在对该细胞疭传导通路完整性的调查上。细胞生长实验结果表明在体外的透扇潘厥芴濉,和然虻膍但不表达或检测不到鞍缀男纬桑疑鲜鯦/藕糯ǖ挤肿颖嗦牖虻淖B己偷鞍妆泶前尚不清楚,可能与该两条基因在细胞中的低丰度表达有关。绝大多数受检基因的半定量—蚇结果与的检测结果有相同的上升或下降趋势,表明了丰富的信息。干扰素仪是一个多生物学效应的细胞因子,在发挥不同生物学功能时,结果表明:干扰素灸艿骺豈赴卸嗵跣藕糯ǖ纪如和痟刃藕糯ǖ挤肿颖嗦牖因的表达,惟独不影响疭信号传导通路上蛋白分子编码基因的表达。在以往文献报道中,我们发现疭信号传导通路是介导干扰素抗肿瘤细胞增殖作用中至关重要的一条信号传导通路。,、/干扰素Ⅸ抗醉癌┢敲阜肿踊硌芯博士论文R
细胞疭信号传导通路的缺陷可能是导致该细胞对干扰素Ⅸ第三部分:干扰素疽种芃闶笠浦擦鲅9苄纬傻姆肿踊硌芯泌的作用。上述结果提示干扰素疽种芃闶笠浦擦鲅9苄纬傻姆水平均不受干扰素Ⅸ的调节。核苷酸测序分析发现细胞素灸芤种浦柿WH鞠赴觭期到/诘墓桑艺庵忠种谱饔每赡我们前期的实验证实大剂量干扰素旺能明显抑制裸鼠人肝癌转移模型图从肿瘤细胞的角度进一步阐明干扰素种芃赴闶笠浦擦鲅管形成的分子机理。基因芯片检测的结果显示:在细胞结构性种不同分子量的蛋白亚类中,干扰素旺主要能下调鞍椎信号通路特异性抑制剂和信号通路特异性抑制剂苣D飧扇潘豠调节蛋白合成和分子机理可能是通过阻滞细胞中的多个碱基存在着点突变和插入突变。用含全长的表达质粒瞬时转染细胞,使其表达鞍祝⑾肿H鞠赴指戳硕詌,/干扰素Ⅸ增殖抑制的敏感性,短宸治霰砻鞲扇通过下调细胞周期调控蛋白虲谋泶锸迪值摹结果表明增殖抑制作用无应答的的主要原因之一。瓺中肿瘤的生长和转移,其疗效与