[优秀论文]2型糖尿病性早期心血管病变相关新基因的筛选及其结构_功能分析.pdf

上海第二医科大学
博士学位论文
2型糖尿病性早期心血管病变相关新基因的筛选及其结构/功能
分析
姓名:张芳林
申请学位级别:博士
专业:内科学,内分泌和代谢病
指导教师:罗敏

基于以述设想,悻研究在以下龇矫娑型糖尿病性心血管早期病变进行现。义吞悄虿⌒栽缙谛难9懿”湎喙匦禄虻纳秆〖捌浣峁梗δ芊治/心血管病变不仅是吞悄虿』颊叩闹饕K酪颍浞⑸室步弦话闳巳焊摺建立吞悄虿⌒孕难9懿”浯笫竽P汀铝鋝笫蟾呷攘恳澄寡发展进程快、病情重,加强其发病机理的研究十分必要。疾病的发生、发展无不发病机理。型糖尿病大鼠模型建立后半个月抽提大鼠心肌及主动脉总博士研究生:罗敏源于相互作用的相关基因尤其它们早期表达的差异,但迄今为止对于糖尿病性一血管病变相关基因早期的差异表达及其网络调控研究几乎处于空白。随着人类基因组草图的完善,以及生物信息学的迅速发展,用整体、动态的观点去探索疾病的发生机理势在必行,揭示疾病早期相关基因表达谱的变化不仅是生命科学研究的一个重要方向,对于指导下一步的俅惭芯恳簿哂兄匾R庖濉N4耍颐巧柘从建立吞悄虿⌒孕难9懿”涞拇笫竽P腿胧郑杂ü獗昙堑膍钜煜示技术筛选病变早期差异表达基因并对其进行生物信息学分析,以期为吞悄病性心血管病变发生机理的阐明提供一点线索。鲈潞蟾栊〖亮縎/型糖尿病模型,模型建立后半个月、—鲈隆个月取大鼠心肌及主动脉进行电镜观察及胰岛素一葡萄糖耐量试验、饮食等各组大鼠相应指标比较。各项指标说明,该模型具有外周胰岛素抵抗和胰岛功能仅轻微受损等特征,超微结构观察证实心血管病变随着病程延长而加重。该模型主要特点在于:①与人类普通吞悄虿〉姆⑸⒎⒄构滔嗨啤"赟用量小,而低剂量的τ媚茏畲笙薅鹊乇苊馄湟认偻夥茄≡裥缘淖饔谩"鄹模型动物无需治疗生命即能维持较长时间,可用于吞悄虿÷圆⒎⒅⒌南喙研究。④吞悄虿∧P徒⒑笮募“ㄏ吡L宓氖亢椭柿俊⑾赴渲试谀诘超微结构先后发生改变,同时也观察到电镜下主动脉内皮损伤和平滑肌增殖等表基于上述模型,应用荧光标记的—际跎秆∠喙鼗虿⑻教制行荧光标记的差异显示分析,及半定量证实候摘要张芳林较为全面而深入的探讨。胰岛免疫组化和其它糖代谢相关指标的检测,并与大、小剂量⒌ゴ扛呷攘导师:上海第二医科大学博士学位论文、
素尊挥的作用。新基因—牡缱涌寺〖,新序列个,部分新靶禄已提交并被邮堋I秆〉玫焦δ芙衔C魅返牟钜毂泶锘蛏婕跋赴藕转导、细胞凋亡、离子通道和运输、能量代谢、蛋白翻译和合成等。①多个与钙依赖的钙转运子表达下调,可能是病变组织钙超负荷的一个重要原因。②铣擅竝亚单位、细胞色素亚单位寻泵堑ノ辉诓”渥心肌及主动脉的转录水平上调。③与凋亡调节密切相关、表达上调的候选基因有蛋白酶体和新基因,后者在病变包括线粒体在内的早期病理形态尚未发生改变时水平已增高,随着病程的进展降低,但仍高于正常水平,提示—诓”浞⑸缙谑录械闹匾W饔谩U庑┖蜓』虻牟钜毂泶镌缬组织超微结构的改变,提示它们所处的某些能量代谢、信号转导或是离子调节以及这些通路间平衡失调在病变发生中可能就是心血管功能及结构失调的始发因利用膁数据以电子克隆的方法进行延伸,⒉庑蛑な敌蛄械拇嬖诤妥既沸裕玫饺ǔ氨基酸的蛋白进行同源性分析和结构/功能预测,提示它可能具有调节钙浓度及促进凋亡的功能。另外在新基因非编码区发现若干转录调控基序,,编码的个氨基酸的蛋白与低等动物内体/溶酶体膜蛋白、丝氨酸/苏氨酸具一定同源性,且含有视紫质样峁褂蚝投喔隽姿峄疤腔奘挝坏悖峁购凸δ茉测进~步提示它是一种胞浆蛋白,可能行使信号转导的功能。另外,本研究将合蛋白,表达量占菌体总量%。通过亲和层析进行纯化,甈蚖选基因的差异表达。从多个条带中选择分离并克隆得到个差异表达的序列,其中已知基因个,己知浓度调节有关的基因如富含组氨酸的结合蛋白、内质网钙泵、。—校璉盏荚诖蟪Ω司斜泶铮竦肦融证实重组蛋白分子量为。上海第二医科大学博士学位论文,融,
血管病变机制的探讨提供了新的思路。≯至此,我们首次成功建立接近人类普通吞悄虿⌒孕难9懿”涞拇笫竽P停并随着病程逐渐出现人类,9懿”涞奶卣餍愿谋洹R源四P臀;。τ糜ü同时涉及细胞凋亡、钙离子浓度调节、能量代谢等通路的假说。首次报道了新基早期水平的增高和后期的下降;,可能行使信号转导的功能。在原核系统中成功表达并通过亲和层析技术获得纯度较高的一鞍住U庑┕ぷ魑型糖尿病早期心【关键词】吞悄虿 P难