E2Z细胞端粒酶活性和细胞周.doc

E2Z细胞端粒酶活性和细胞周.docE2Z细胞端粒酶活性和细胞周
【摘要】目的研究顺铂对人鼻咽癌E2Z细胞端粒酶活性、细胞周期及凋亡的影响,以探讨顺铂诱导E2Z细胞凋亡与端粒酶活性水平的关系以及顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡的可能机制。方法分别以不同的药物浓度作用于体外培养的E2Z细胞不同的时间,用TRAPELISA的方法定量检测E2Z细胞在顺铂处理前后的端粒酶活性水平,同步进行细胞形态观察,流式细胞仪分析细胞周期的改变并检测凋亡。结果 E2Z细胞端粒酶呈阳性。用不同浓度的顺铂不同的时间作用于E2Z细胞,结果细胞周期被阻滞在G1期,出现细胞凋亡,下调端粒酶活性,且呈时间依赖性及剂量依赖性。结论化疗药物顺铂可能是通过改变细胞周期分布(G1期阻滞)并同时诱导细胞凋亡、下调其端粒酶活性而发挥抗癌作用的,故可将化疗前后细胞端粒酶活性的变化作为鼻咽癌化疗敏感性指标之一。
【关键词】端粒酶;鼻咽肿瘤;顺铂;凋亡
Effect of Cisplatin on Telomerase Activity and Cell Cycle and Apoptosis in Human Nasopharyngeal Carcinoma E2Z Cells
Key erase;Nasopharyngeal neoplasm;Cisplatin;Apoptosis
近来研究发现,端粒酶的活化可以避免端粒的缩短,从而使细胞发展成为永生化细胞或无限增殖的肿瘤细胞,通过抑制端粒酶的活性可以抑制肿瘤细胞的生长,可增加整个基因组的不稳定性或使细胞的增殖向分化、衰老和凋亡方向转变[14]。因此,我们采用TRAP—ELISA法定量检测E2Z细胞用顺铂处理前后的端粒酶活性,并同步检测细胞周期变化和凋亡。
1材料与方法

2Z为本室保存。设立实验组和对照组,两组癌细胞同时传代,实验组于传代培养24h后加入工作浓度的顺铂,继续培养24h、48h、72h后收集细胞。
,工作浓度为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L[5,6]。Telomerase PCRELISA检测试剂盒为德国Boehringer Mannhein公司产品。DEPC、牛血清白蛋白购自上海华舜生物工程有限公司。考马斯亮兰G250购自Sigma公司。

。各组细胞取适量,加入荧光染料Hoechst33258及PI至终浓度分别为10μ
g/ml、20μg/ml,37℃避光30min,紫外光激发,荧光显微镜下观察细胞。细胞经Hoechst 33258/PI双重染色后,在荧光显微镜下经紫外光激发,发出粉红色荧光,染色质聚集呈不均匀块状的细胞为凋亡细胞;发出蓝色荧光且染色质分布均匀的为活细胞。
×105个细胞,调成细胞悬液,加PBS 37℃处理细胞30min,加300μl PI染15min,350目筛网过滤后用流式细胞仪检测凋亡细胞含量。如细胞凋亡发生时其小分子量DNA从细胞中丢失,使凋亡细胞的DNA含量降低而导至荧光染料对其可染性降低,在G0/G1期峰前出现亚二倍体峰(亚G1峰或凋亡峰)。