豆磺隆酶联免疫分析方法的研究-农药学专业毕业论文.docx

摘要 帧I沦j
摘要:
小沦文针对目{j{『磺酰脲类除草剂豆磺隆残留分析问题,采用农药免疫分析技术建立了以豆磺疃
|II'uJ体为原料和琥珀酸酐在DBU催化下合成了豆磺隆的半抗原,通过活化脂法获得了突出豆磺隆糕
}性分了结构的免疫抗原和包被抗原,分别以BSA和OVA为载体蛋白。以BSA为免疫抗原免疫葑 n获得高效价的多克隆抗体,用间接ELISA法对抗体的T作条件,抗体的特异性、方法的精确性、垂 2性进行研究。,试验结论如下:
L
1人工抗原的合成及鉴定
利用豆磺隆的特异性磺酰***部位与琥珀酸酐反应制备半抗原,经熔点试验为167 169"C。利片
‘化脂法将BSA与半抗原连接制备免疫抗原;将OVA、HSA与半抗原连接制备包被抗原。通过搿
}扫描;电泳法和琼脂双扩散法三种方法来鉴定连接方法,在免疫前可以通过紫外扫描和电泳方程 k鉴定,在免疫后获得抗体利用琼脂双扩散进行鉴别抗原决定簇。
2豆磺隆ELISA试验条件
利用间接ELISA法测定抗血清与半抗原一OVA,半抗原一BSA,半抗原一HAS结合的中点效价为2×
0,l×i01,l×104与OVA无结合活性。在间接ELISA法测定中用0 05mol/L,
4被抗原(半抗原一OVA)稀释4000倍(v/v)包被酶标板,包被时间3小时(37"C)。抗血清稀释400( 自应用,竞争时间20分钟(37"C).。以邻苯二女为底物,
5 0 2。
--200ng/ml。回归方程为
~+,相关系数r2=。+· 2=0 9933 。%、嘧啶***%、邻2一乙氧基羧基苯磺目安2%、%、***%、%。
4士壤的有机质和有机溶剂对免疫反应的影响实验表明对干扰影响比较明显的是有机质,有机溶剂添加实验表明在5%的添加量时***对抒
奉抗原反应有影响,甲酵影响不大。
5样品回收率和土壤未知样品的测定
%%,土壤未知样品测定为3ng/kg与生物测定的相关性较盘
关键词:豆磺隆,ELISA,半抗原,免疫分析,抗体
摘篮 坝|论文
Studies on immunochemistry for residue of chlorimuron—
methvI
Abstract
CIiIorimuron—methyl of hapten had been synthesized,then the haptenwere covalentlyconjugatedtoboVineserumlbulmin(BSA)orhumanserumalbumin(HAS)or valbumin(OVA)to prepare antigens(immunogens)and coating antigens,The conjugates identified and their molecular ration of hapten to carrier protein were idetermined by UV spectrophoto metry,Sodium dodecyl-suffatepo】ycrylamide Gel Eletrophoresis(SDS-PAGE)and white rabbits were immunized with sythetic antigens the antisera are speafic to chlorimuron—methyl were obtained by using
middi|eand final titers were 1:12500and 1:62500 for anti-CM serum.
the enzyme tagged lgG were prepared by coupling horseradish perxidase(㈣
O enzymeconjugate maintained both immunological activity and enzyme
activity.
The half maximal inhibition to antibody antigen reaction