植物遗传转化技术.ppt

植物遗传转化是指以植物器官、组织、细胞或原生质体作为受体,通过某种技术或途径转入外源基因,获得使外源基因稳定表达的可育植株的过程。
植物遗传转化
植物遗传转化方法
植物遗传转化常用的方法
1、载体法转化——农杆菌介导法(Ti质粒)
2、非载体介导的遗传转化
(1)基因枪法
(2)超声波法
(3)脂质体法(又称融合法)
(4)电转化
(5)花粉管转化
将待转化的DNA沉淀在细小金属珠的表面,用特制枪将金属珠直接打入植物细胞,枪的威力为430 m/s,植物细胞通常是胚胎细胞、玉米籽、叶片等,但进去的DN***段整合效率极低。
1 基因枪转化法
将高浓度的质粒DNA加入到植物细胞的原生质体悬浮液中,混合物在 200-600V/cm 的电场中处理若干秒,然后将原生质体在组织培养基中生长,再生出整株植物。
2 电击法
将外源DNA与特殊的疏水性高分子化合物混合,在水中这些疏水性化合物分子形成球状的脂质体,后者与植物细胞原生质体融合,筛选融合子,再生植物细胞壁。
所有涉及到植物原生质体的基因转化方法均存在一个难题,即:原生质体再生出整株植物比较难。
3 融合法
外源DNA沿着花粉管经过珠心进入尚未形成正常细胞壁的卵、合子或早期胚胎细胞中,从而实现基因的转移。
这一方法是我国科学家周光宇首先提出设计的,目前已应用于水稻、小麦、棉花、大豆、花生、蔬菜等作物的转基因研究。
4 花粉管导入法
花粉管导入法的特点是直接、简便。
受体材料为植株整体,省略了细胞组织培养的诱导和传代过程,排除了植株再生的障碍,特别适合于难以建立有效再生系统的植物。
由于转化的是完整植株的卵细胞、受精卵或早期胚胎细胞,导入的DNA分子整合效率较高。
几乎所有的双子叶植物尤其是豆科类植物的根部常常会形成根瘤,这是由于植物根部被一种革兰氏阴性土壤杆菌农杆根瘤菌(A. tumefaciens)感染所致,其致瘤特性是由该菌细胞内的野生型Ti (Tumor-inducing)质粒介导的。
5 农杆菌介导
植物遗传转化载体