[优秀论文]神经干细胞移植修复脊髓损伤的作用及相关机制的研究.pdf

上海第二医科大学
博士学位论文
神经干细胞移植修复脊髓损伤的作用及相关机制的研究
姓名:曲静
申请学位级别:博士
专业:发育生物学
指导教师:盛慧珍
20040401
,黼桨讣案噔蛴中文详细摘要捎杷鹕籍麴神经元和神经纾缝功熊狠难恢复,将导致患者局部的感觉、运动、反射私植耪神经功辘的丧失。虽然醚裁临床主对闹瘟朴卸嘀滞揪叮偕形抻行У闹瘟剖段促遴聋鑫突的饕生以及攒伤神经功能的恢复。近年来,宰誊经于细胞不仅有助子了鳃中枢襻经系统饕的是对于修复章审经系统损伤,促进功能恢复具有熏要意义。围内外大量的研究表阏、嗅球等区域顾枋依槟と源嬖谧虐鲦锒啾狗植锫戳Φ腘。此外,腿胎予缨胞,逋庥疹宦兑部梢詌乍为静予缨施移攮治疗在治疗芯哂泄憷ɡ龉饷鞯腏踅用前景。然而,τ糜诹俅玻杂行矶喙丶的技术与理论闷题需要研究和解决,例如:体外诱导聪胎干细胞后舅的细胞的纯化滔题;浦布茜苌思顾杞峁褂牍δ芑指丛详そ耍蝗绾伪堋教岣吡菩В行地键进地牛怀商宸熳褐蠳憋筛选、纯纯,在体肉调控鼋⒎执坑:菱捷鑫奄信号分予与枧制等等。在国浅外大凝研究的基础上,本课题主要从下列两个方函圈绕泼手瘟第一部分:胚胎干细胞来源的神经干细胞移植促进小鼠损伤脊髓结构与功能的恢复以及裰关税铡豹缣簕雩。本部分研究赣走致力予寻找懿簿扶小鬣嚣窕袢灬源慷嚷窗牯溆的方法;其次,观察分毒斤了使用事孛经信号分予者骝因予∞,方塞诱导后的坪持瘟芐鼠结构与功能恢复,并进一步探讨了薷此鹕说姆方案对小鼠琶细胞株托衶奉外诱导培养,然籍餍抗、、、脊柱的爆裂骨折或脱位经常会弓鸺顾杷鹕的研究进展戈瘟颇焖恿艘桓鋈泗稹⒂袖矸毂7⒄鸱侥摇U獍芯,黪发育过程,更为羹瞬:在发育中的大部分脑区;成年哺乳动物脑中的特定部位如室铃;膜下、海马齿状3醪降难芯肯饕浦睳可以促进锊糠衷硕⋯蹦赖幕指矗允玖薔南喙乜蒲侍饨辛颂教郑铡。方法:采用维甲酸,,.海第一沃张大学磷畚
:趋化因予与其唯一的按雅剂J躿本Ω榛プ饔锰岷寥肼摭体慰诱导蜃煎细臆进行免疫纲施讫学染色鉴定,照徽镜下诗数各种类型隧性纲胞的数翻,并计算神经上皮干细胞爨白阳性细胞占所有细胞总数的比例。舅茂质体转染法将蒸因导入小鼠细胞,继而应用桨赣盏己笠浦步爰顾韬岫髓横断小鼠体内检测到大是的甮性细胞,移植盾一个月平均每张切片距损伤中学染色显示察阉性细髓枣要表达疆簸乙溅转移酶帮麓鞲碱性蛋白琀染色显示细胞移植组的脊髓灰、臼质结构有了一定的恢复,移植细胞由损伤处迁移人胎魅谋硇停庖呦赴旧ǘ云涮逑鐌分傀麓力遴行了鉴定,与瀛式细胞仪检测了敕只驨验测试了外源性的对那鞔孔饔茫庖咦橹Х椒ḿ觳饬苏S胨鹕脑组织谋泶铩=峁悍鋈肱呗娲笃锲分离褥到了悬浮培养静霉枣经予缨胞团备谋渑嗝Ъ兰罂梢蕴只⒎直鸨泶锷窬!⑿切谓吼细胞、少突胶质细胞的表面标志:一琈琋,A魇较复嘁欠治鱿示槐泶顲珻泶顲泣与分纯蜃麴泶镯因子受体罢叩谋泶锼礁哂诤笳撸襌噝峁肓魇较嘁恢拢辞小鼠体内,分别予移植后鲈隆个月霜进行话阬染色遗踪移戆缨施⒓剖甮日性细胞行免疫荧光组织化学染色鉴定细胞类型;染色分析组织结构恢复情况;婪址治隽诵∈篌硕﹃さ聂雀础=岵桑与桨傅玫降阳性缨胞的￡旱狗宙瘴ゼ綰。%。缨胞移植盾銎洹个月均可凌脊心约处的甮染色阳性细胞总数为纚一繱觥C庖哂ü庾橹了侔浦沧築评分高予对照组。脑神经于细胞体外迁移能力的实验研究。本部分实验首次发蠛了趋纯因予受体谌隢中的表达以及趋纯因子受髂与其瞧一豹醚体之目的相互作用可以摇离本终迁移麓力,在此基础上,对趋化因予猯信号在人ㄒ浦兄匾5恼镅б庖褰辛顺醪教讨。方法:从周左右人胚胎大脑皮鼷中分离、培养了魇较赴欠治隽膍⒌鞍字时泶锼剑琓实表达分板缝果发瑰加入外溅悭的对兴粝增笄鞑飡乍用上海第二医科人学博士论文
,。兔疫组亿结果表明:在人胚胎大脑主要是分子鼷、外颗粒层的神经细胞以及脑胶质瘤组织均高表达。综上所述,得出结论如下:第一部分:通过比较与街痔逋庥盏挤桨附婢谙赴盏技痢=徊降奶迥谑笛榉⑾郑阂坪砈方案诱导得到的郕小鬣体肉,移植细胞∨拐系搅狈嶙橹泶锍墒斓ḿ钅苌窬5谋曛炯八枨始细胞在局部损伤部位分他为享孛经元与中枢享孛经系统的髓鞘形成纲胞少突胶覆细胞,此外,由于浅さ纳窬宋乃鹕耍虼耸淙胩迥诘腘能否大量、定向迁移到攒饬部位并与耀围细胞、组织发生功雒性整合是影响疗效的一个关键闵紊。本文第一部分的体内实验也发现移植细胞在宿主体内大多数呈散在分布,而基本上没能形成功能性缨胞豳。如果了解ㄏ蚯ㄒ频姆愣纾糜新赌苡行У刂富覰分研究结果首次发现了人胚胎大舷皮质的泶镯蜃邮芴錍,在体乡亩ㄏ蚯ㄒ乒獭=徊降匮芯糠⑾郑吣宰橹钟璨恪⑼饪帕2悖荒韵鐌伤组织边缘;脑胶艨瘤组织高表达崾疽峥邵蝕甶/鹘谀运鹕恕脑肿瘤等病理过程中亩ㄏ蚯ㄒ啤关键调:神经予缨脆移植脊髓攒伤神经臀生趋仡/元和神经胶质细胞高表达,而脑外伤组织大脑皮层边缘的