GDNF修饰的神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究.pdf

上海第二医科大学
博士学位论文
GDNF修饰的神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究
姓名:孙勇
申请学位级别:博士
专业:免疫学
指导教师:陆佩华

胶质细胞源性的神经营养因子基因修饰的胚胎神经干细胞移植治疗脊髓损伤陆佩华徐晓明神经生物学实验室上海第二医科大学贾略硕透芯醮ǖ纪氛****鹚鹕以下部位部分或全部运动和感觉功能的丧失。其发病呈现两个明显的病理反应阶段,即以出血、水肿、细胞坏死以及伴随炎症性细胞因子、毒性自由基及蛋白酶释放引起的急性炎症反应为特征的初次损伤和以延迟性细胞死亡、脱髓鞘、慢性炎症反应及胶质瘢痕形成为特征的继发性损伤。目前应用神经保护剂和细胞移植治疗讶〉靡欢菩АW罱蛑瘟埔驯挥糜诩顾杷鹕说囊浦仓瘟啤1鞠研究采用胶质细胞源性的神经营养因子,蛐奘闻咛ド窬上赴缓蠼湟浦仓良顾杷鹕舜笫竽P停观察其对脊髓损伤的治疗作用。胶质细胞源生的神经营养因子亲;ひ蜃映易的一个远系成员,它对胚胎中脑多巴***神经元、脊髓运动神经元、颅感觉神经元、交感神以及后脑去甲肾上腺素能神经元哂忻飨缘拇存活作用。。也可促进神经于细胞琋的存活与分化。是具有自我增殖、自我更新和分裂特性的细胞群,在体内外可分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞。移植到体内可迁移、整合并能稳定表达外源基因,是中枢神经系统疾病基因治疗的良好载体。克隆至逆转录病毒载体,琼脂糖凝胶电泳及庑蚓允疽鸦竦弥刈楸泶镌靥錺瓽瓽得了具有感染力、滴度为/的病毒液。用这种病毒感染体外培养的丛从谂咛天大鼠大脑皮质神经干细胞经被病毒感染后,博士研究生:孙勇中文摘要脊髓损伤我们将大鼠跋赴祊赴啊秆『蚇味炔舛ê螅颐腔导师:.,上海第娇拼笱Р┦柯畚
型,于处损伤大鼠脊髓。脊髓损伤动物在清洁级动物房护理旌螅和ㄗ;蛏窬上赴鸊甆鼙泶锖头置诟呒亮嘌校尤隚甆锨逡海爰尤胍吧上清液比较,前者能明显促进多巴***神经原的存活,与多巴***┙峁砻鱃甆刹大量的具有生物活性的外源。然后我们将浦仓良顾杷鹕舜笫螅鄄炱湓谔迥诘拇婊睢⑶ㄒ和整合以及对脊髓损伤大鼠功能的修复作用。我们采用动脉夹夹击脊髓损伤模發的/畉注射至损伤部位。经过一个月治疗,我们观察到一种核染料孪缺昙堑腉甆纱婊畈⑻畛浠蚍布于损伤的脊髓周围;窬疤逑赴砻嫣匾煨员昙染色可见一些尚未分化的细胞:移植的上蛩鹕说耐泛臀睬ㄒ拼单独移植组比较,浦沧榧顾杷鹕嗣婊飨约跣,,可显著减少脊髓损伤面积,促进脊髓损伤大鼠的功能丶省考顾杷鹕私褐氏赴翟瓷纳窬Q蜃幽孀B疾《驹靥錚的外源。在原代胚胎中脑多巴***神经原【:与和硕婪纸峁允久飨缘母纳结果均为:而与对照组相比,上恢复。病毒滴度转染胚胎神经干细胞细胞移植上海第二医科大学博士论文中文摘要
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种膜性结构的降解,产生的大量血小板活化因子覨⒀Kㄋ谹土鲞笪三蜃型盔兰堡主丝塞一——————童脊髓损伤侨死嗨淖罹咂苹敌缘耐馍酥唬给病人、家庭和社会造成巨大影响和经济负担。在美国,每年大约新增,个脊髓损伤患者,坐在轮椅上的患者已超过,仅治疗费用每年高达亿美元。在我国,还没有对脊髓损伤病人作过详细统计,但仅唐山大地震中,就有约人遭受脊髓损伤之苦。脊髓损伤后导致下行的运动传导通路和上行的感觉传导通路障碍,损伤以下部位出现部分或全部运动和感觉功能丧失,包括肠、膀胱、性功能以及司职疼痛的屈肌或伸肌痉挛。导致脊髓损伤的原因很多,主要有交通事故,体育运动,跌跤以及暴力%,即急性损伤和慢性损伤过程。前者由于机械损伤和出血导致:能量代谢障碍,维持细胞内外离子平衡的离子泵衰竭,外流、诹鳎琋碌哪诹鞔疌退罅拷氚冢贾孪赴运肿:另一方面,胞外浓度升高,神经元去极化,引起神经末梢内谷氨酸大量释放至胞外,持续过度刺激兴奋性氨基酸受体,大量内流。哪诹骷せ各种降解酶字竎和蛋白激酶⒑怂崮谇忻傅,导致神经元磷脂膜、细胞骨架蛋白、核酸等重要结构解体,神经元坏死;同时由于神经元富含磷脂的各白三烯约白杂苫寡9苁账酰9苣谄は赴鹕耍D云琳峡7牛各种细胞器解体致使大量炎症性细胞因子、蛋白酶释放,加重细胞毒性水肿和血管源性水肿】。这一反应过程发生在损伤后的数分钟至数小时。随着损伤的继续,累及邻近正常组织或细胞,脊髓损伤便进入慢性期。由于急性期的大量自由基堆积