地奥心血康对缺氧 复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用.doc

地奥心血康对缺氧复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用
材料与方法
实验药物地奥心血康粉,由国家天然药物研究中心提供;纯度为98%,常温避光保存备用,用时应用磷酸盐缓冲液稀释。
方法
乳鼠心肌细胞的分离培养参照Boerma·M等建立的方法并加以改进。心肌细胞培养第4天随机分组进行实验。
缺氧/复氧(A/R)损伤模型的建立采用Koyama·H等方法建立缺氧/复氧模型。
实验分组①空白对照组:实验时更换无血清培基,置CO2培养箱内孵育24小时,然后用复氧液漂洗细胞2次,加入复氧液置培养箱3小时后,再换复氧液孵育。②缺氧/复氧组:按照上述方法制造模型。③地奥心血康低、中、高剂量干预组:缺氧/复氧前,分别用终浓度为10μmol/ml、20μmol/ml、40μmol/ml的地奥心血康与细胞孵育30分钟,然后依次进行缺氧,复氧操作。
观测指标①MTT法检测心肌细胞存活率;②TUNEL法检测心肌细胞凋亡百分率;③心肌细胞[Ca2+]i的测定;④NO的测定。
统计学方法数值用x±s来表示。各组间均数的比较用单因素方差分析,其中均数间的两两比较用LSD检验。采用系统统计软件SPSS ,P<。
结果
地奥心血康各剂量干预组对缺氧,复氧损伤后心肌细胞存活率的影响缺氧/复氧组心肌细胞严重受损,%,而地奥心血康各剂量干预组心肌细胞受损较缺氧/复氧组明显减轻,具有统计学意义(P<),地奥心血康各剂量干预组间差异无统计学意义。见表1。
地奥心血康各剂量干预组对缺氧/复氧损伤后心肌细胞凋亡指数的影响缺氧/复氧损伤后心肌细胞发生调亡,凋亡指数(A/I)升高;地奥心血康各剂量干预组与缺氧/复氧组比较,心肌细胞A/1明显降低,具有统计学意义(P<)。见表1。
地奥心血康各剂量干预组对缺氧/复氧损伤后心肌细胞[Ca2+]i的影响正常培养的心肌细胞,[Ca2+]i水平随细胞的跳动均匀而有规律改变。心肌细胞缺氧/复氧后,[Ca2+]i荧光强度增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<)。地奥心血康各剂量干预组[Ca2+]i浓度变化接近正常,[Ca2+]i荧光强度低于缺氧/复氧组,差异有统计学意义(P<)。见表1。
地奥心血康各剂量干预组对缺氧/复氧损伤后心肌细胞NO浓度的影响
缺氧未能刺激NO的分泌量发生显著变化。在复氧7小时后,缺氧/复氧组NO合成量显著增加(P<),地奥心血康在此时能显著减轻NO浓度。
讨论
诱导细胞凋亡的因素很多,而在心肌缺氧/复氧引起的细胞凋亡中主要机