实验二微量凯氏定氮法测定总氮量ppt课件.ppt

实验二总氮量的测定―凯氏定氮法
一目的:学****凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理和操作技术
二原理:通过含氮有机物与浓硫酸共热生成硫酸铵,后与浓碱反应产生氨经硼酸吸收后用标准无机酸滴定即可测出待测物中的总氮量
三试剂:浓硫酸(化学纯)、粉末硫酸钾—硫酸铜混合物、NaOH、硼酸、盐酸、田氏指示剂(甲烯蓝乙醇与***红乙醇混合)、面粉
四器材:凯氏定氮烧瓶、凯氏定氮蒸馏装置、50ml容量瓶、3ml微量滴定管、分析天平、烘箱、电炉、100ml蒸馏烧瓶、小玻璃珠
五操作步骤
六实验报告
二、原理
生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义,蛋白质的含氮量约为16%,测出含氮量则可推知蛋白含量。
消化:有机物与浓硫酸供热,使有机氮全部转化为无机氮——硫酸铵。为加快反应,添加硫酸铜和硫酸钾的混合物;前者为催化剂,后者可提高硫酸沸点。甘氨酸的消化过程可表示如下: CH2NH2COOH+3H2SO4 2CO2+3SO2十4H2O十NH3 2NH3+H2SO4 (NH4)2SO4
浓碱可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氨,借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后使溶液中的氢离子浓度降低,然后用标准无机酸滴定,直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止,最后根据所用标准酸的摩尔数(相当于待测物中氨的摩尔数)计算出待测物中的总氮量。
~ mg的氮量测定。
三、试剂
1、浓硫酸 200mL
2、粉末硫酸钾―硫酸铜混合物 16g  3:1配比研磨混合
3、30%氢氧化钠溶液 1 000 mL
4、2%硼酸溶液 5 000 mL
5、标准盐酸溶液( mol/L)
6、混合指示剂(田氏指示剂)  %%***红乙l醇溶液混合配成,贮于棕色瓶中备用。这种指示剂酸性时为紫红色,碱性时为绿色。变色范围很窄且灵敏。
7、市售标准面粉和富强粉各2g
五、操作方法

原因: 某一固体样品中的含氮量是用100g该物质(干重)中所含氮的g数来表示(%)。
方法:一般样品烘干的温度都采用105℃,因为非游离的水都不能在100℃以下烘干。
在称量瓶中称一定量磨细的样品( g左右的干燥面粉),然后置于105℃的烘箱内干燥4小时。用坩埚钳将称量瓶放人干燥器内,待降至室温后称重,按上述操作继续烘干样品。每干燥1小时后,称重一次,直到两次称量数值不变,即达恒重。
若样品为液体(如血清等),可取一定体积样品直接消化测定。
2消化
取4个100mL凯氏烧瓶标号。各加l颗玻璃珠,,催化剂(K2S04―CuS04?5H2O)200 mg,消化液5 mL。在3及4号瓶中各加0,1 mL蒸馏水和与1及2号瓶相同量的催化剂和浓硫酸,作为对照,用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质。每个瓶口放―漏斗,在通风橱内的电炉上消化。注意加样品时应直接送人瓶底,而不要沾在瓶口和瓶颈上。当消化开始时应控制火力,不要使液体冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完,硫酸开始分解并放出SO2白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明淡绿色为止。
定容:冷却后,加蒸馏水约10 mL。(注意慢加,随加随摇)。然后将瓶中溶物倾人50 mL的容量瓶中,并以蒸馏水洗烧瓶数次,将洗液并容量瓶,用水稀释到刻度,混匀备用。
蒸馏器的洗涤
1. 接通冷凝水,先向蒸汽发生器中加入一定量的水(先关闭进水口,再关闭出水口,以排水口高度为宜),用酒精灯将其加热烧开。
:
将蒸馏水由加样室加入反应室,
将酒精灯移开片刻,
打开自由夹,使冷水进入蒸汽发生器,
如此反复清洗3-5次。
mL,2%硼酸溶液和1~2滴指示剂的混合液。如不变色则表明蒸馏装置内部已洗涤干净。
3蒸馏过程:
准备:
取50 mL锥形瓶数个,各加入5 mL 2%硼酸溶液和1―2滴指示剂,溶液呈淡紫色,用表面皿覆盖备用。
关闭冷凝水,打开自由夹,使蒸汽发生器与大气相通。将一个盛有硼酸和指示剂溶液的锥形瓶放在冷凝器下,并使冷凝器下端浸没在液体内。
加样:
用移液管取5 mL消化液,细心地加入反应室,随后加入30%NaOH溶液5mL,关闭自由夹,在加样漏斗中加少量水做水封。
蒸馏:
关闭自由夹,打开冷凝水(注意不要过快过猛,以免水溢出)。
点燃酒精灯,蒸馏开始,当观察到锥形瓶中的溶液由紫变绿时(约2―3分钟),开始计时,蒸馏3分钟,移开锥形瓶,使冷凝器下端离开液面约1cm,同时用少量蒸馏水洗涤冷凝管口外侧,继续蒸馏1分钟,取下锥形瓶,用表面皿覆盖瓶口。
蒸馏完毕后,应立即清洗反应室,方法如前所述。如此3~5次