血清蛋白质标记物在肾母细胞 瘤中的临床应用研究.ppt

血清蛋白质标记物在肾母细胞瘤中的临床应用研究
郑州市儿童医院普外科陈新让
无法满足临床无创、简便、高效、快速的早期诊断及指导治疗和监测预后的要求
肾母细胞瘤诊断现状
B超
彩超
CT
肾动脉造影
MRI
IVP
同位素骨扫描
腹部平片
临床要求:准确、无创、简便、早期诊断制定治疗方案指导临床分期和监测预后
研究应用新的技术手段与判断方法
构建肾母细胞瘤早期诊断
分期模型及预后模型
肿瘤细胞的
蛋白质表达谱
生物信息学
基因组表达的整套蛋白质进行分析
正常对照的蛋
白质表达谱
蛋白质组学
多种标志物联合
诊断
模型
蛋白组学的发展为肿瘤诊断提供了新的思维和技术平台
分期
模型
预后
模型
SELDI-TOF-MS特点
高通量(96孔)
可靠的重复性
灵敏度高(1-50fmol)
简便(无需纯化样品)
检测范围广(500Da-500kD)
所需样本体积小(-400ul)
生物信息学技术
树型决定结构
等级分聚类
人工神经网络
支持向量机
支持向量机主要思想
1. 使用非线性映射算法——
将输入向量映射到高维特征空间
2. 基于结构风险最小化理论——
在特征空间中建构最优分割超平面
临床资料
血
清
样
本
75
例
正常对照20例
其他小儿腹部实体肿瘤25例
肾母细胞瘤100例
神经母细胞瘤9例
肝母细胞瘤5例
胰母细胞瘤2例
腹膜后畸胎瘤5例
(男11例,女14例,平
)
(男63例,女57例,)
横纹肌肉瘤3例
(来自本院小儿外科门诊体检的健康小儿。性别、年龄与肾母细胞瘤配对)
所
有
标
本
均
经
病
理
证
实
肾上腺皮质癌1例
PBS-Ⅱ型SELDI-TOF-MS系统

分析参数:
激光强度为170,
灵敏度为6,
每个样本收集总点数140次;
收集数据范围1000-50000Dal
优化范围2000到20000Dal。
主要试剂

NaNc: (上海生工生物工程公司)
脲素: (Promega Inc. 美国)
乙腈: (Sigma Inc. 美国)
CHAPS: ( Promega Inc. 美国)
SPA: 能量吸收基质(Ciphergen Inc. 美国)

U9缓冲液:9M脲素、 2% CHAPS、1%DTT 50% 饱和SPA,充分振荡5分钟,离心1分钟,再加上等体积的上述混合溶液