高效液相色谱定性定量分析方法.ppt

高效液相色谱定性定量分析方法
申海艳
2012-11-10
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色谱分析的目的:
对未知组分进行定性分析
对已知组分进行定量分析
根据色谱图上某个色谱峰的保留时间和该色谱峰
在检测器上的响应信号强度,对该谱峰进行初步定性
定量分析。
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液相色谱定性分析
液相色谱定量分析
影响定量分析的因素
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色谱峰的定性鉴别:
通过保留值(通常指保留时间)进行定性
需要制定保留时间误差范围
在相同分析条件下
保留时间相同并不一定是同一组分
保留时间不同肯定不是同一组分
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用“标样”的保留值定出被测组份的位置
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标准加入法
将已知标准物质加到待测样品中,若某一峰增高,且改变色谱柱或流动相组成后仍能使该峰增高,则可基本认定该峰与标准物质为同一物质。
DAD检测器
可同时比较保留时间和紫外光谱图。如果两项均一致,则可基本上确定为同一物质;如果保留时间一致,而紫外图谱有较大差别,则判定两者不是同一物质。
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两谱联用技术
1 如果标准物质缺乏或难以获得;或由于结构、理化性质相似,很多物质具有十分接近,甚至相同的保留值,则保留值定性准确度存在疑问。
2 可以运用红外光谱、紫外光谱、核磁共振光谱和质谱对化合物进行定性,目前两用技术有:HPLC-紫外光谱,HPLC-红外光谱,HPLC-MS, HPLC-NMR等。
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液相色谱定性分析
液相色谱定量分析
影响定量分析的因素
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确定样品的类型,主要成分/痕量成分
使分析条件的分离度(R)大于:
色谱峰的定性,峰一致性测定
检测限及定量限:确定灵敏度及线性范围
用标样建立标准曲线
检查方法的准确度及精确度
用标样定期检查方法
定量分析的具体内容
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准确度的衡量
色谱方法是相对定量方法,如不考虑损失及杂质干扰等的因素,其结果同“标样”的准确程度关系密切
一般的衡量方法是做回收率实验或不同方法之间的比较:相关系数
相关系数:
其中,X及Y分别代表不同方法的实验值及平均值
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