精品论文-线粒体DNA+16srRNA和ND4基因荧光标记复合扩增在法医学种属鉴定中的应用研究.pdf

优
秀
毕
业
设
计
论
文




二0 年月
在法医学种属鉴定中的应用研究线粒体蚇基因荧光标记复合扩增李英碧副教授四川大学华西基础医学于法医学院【摘要】目的本课题旨在构建一种新的线粒体属鉴定提供备选技术手段。方法从基因数据库中搜索并获鸡、鸭、羊、牛等南吡L錎序列,并利用基因数据库的序列分析软件,对人与上述动物的线粒体蛄薪型葱苑治觥@靡物设计软件陨秆〕龅牧礁鰉序列蚝蛏杓屏蕉砸铮慷砸镏械囊惶踉’端标记荧光素0创掣春侠┰黾际跏紫冉⒏春侠┰鎏逑担缓笥肁蚍治鲆嵌圆锝蟹治觯⑹匝榧觳夥椒āS媒的检测方法对人及十四种不同的动物懈春侠┰龊图觳猓⒍例实验室存放甑某戮扇搜:劢屑觳狻=ü獗昙歉春侠┰鎏逑怠蚍治鲆嵌岳┰霾锝屑觳馐保死郉扩增产物出中文摘要研究生田力导师成都蚇基因的荧光标记复合扩增检测体系,以期为法医学种得人和多种动物ê铩⒅怼⒐贰⒂恪⑹蟆㈦嗍蟆⑼谩⒙怼Ⅶ恪⑼堋海篬ù笱妒柯畚法医学.
现两个峰,即片段大小分别为的人类特异片段和娜擞攵物共有片段,而动物┰霾锍鱿忠桓龇澹未笮∥。对个试验室存放甑某戮扇搜:劢屑觳猓砍晒斐和牧礁銎危揪苊魅放卸现质衾丛础结论成功建立了可应用于法医学种属鉴定的ü獗昙歉春侠┰黾觳馓逑担该体系可以明确区分人源性生物检材与其它常见动物样本,体系对实验室长期存放的陈旧检材具有较好的检测能力。【关键词】法医学线粒体质艏基因因聚合酶链式反应ü獗昙且锔春侠┰阳¨笱秨一论文ㄒ窖田力
.,骸荆琧·,,四川大学硕畚法医学嗣力,,,.,
..琺,琺四川大学硕十论文ㄒ浇用力..琽.、.
非编码区序列、肌红蛋白基因序列、线粒体蛄谐。蠵扩线粒体蚇基因荧光标记复合扩增在法医学种属鉴定中的应用研究前言种属鉴定在法科学中占有十分重要的地位,其主要任务是鉴定刑事案件所涉及的各种生物检材的种属来源,确定检材是否来自人体,必要时还需确定检材来自哪种动物。经典的种属鉴定方法主要是通过沉淀反应、电泳、凝集反应等技术检测检材中是否具有种属特异性蛋白质成份来达到种属鉴定目的。在刑事案件现场的生物检材会受到诸多因素,如雨淋、酶解、污染等的影响,而蛋白质分子容易变性降解和受环境的影响,所以对于陈旧和降解严重的样本,这些经典的种属鉴定方法常常不能获得理想的结果;与觳饧际跸啾龋涞闹属鉴定方法的灵敏度相对较低,不能满足微量检材检验鉴定的需要:此外,经典的种属鉴定方法的种属特异性是相对特异,不能很好区分亲缘关系很近的种属。与蛋白质相比,肿痈游榷ê吞匾臁=昀捶肿由镅Э速发展,治龇椒ㄔ诜ㄒ窖е质艏ㄖ杏τ玫难芯恐鸾ピ龆唷M过对染色体和线粒体礁銮虻姆治觯梢苑⑾忠恍┎煌镏旨的蛄胁钜欤谜庵植钜欤汕植煌镏郑兄谟行Ы饩生物样本的种属鉴定问题。以种属之间遗传变异为基础的治龇法能够提供更大量的关于种属起源的可靠信息,并广泛应用于法医学种属鉴定。已报道的应用于种属鉴定的治龇椒ǎ饕J嵌匀死特异性蛄如基因序列、短串连重复序列、’四川大学颂仁论文ㄒ窖田力.
增并检测扩增片段,实现种属鉴定的目的。当检测方法以染色体基因片段为检测目标时,需要获得核0濉2拍芙杏行У闹质艏ā对于一些质量很差的生物检材,如十分陈旧和降解严重的生物检材、陈旧的骨碎片和毛干,不能获得满足检测需要的核蛘呒觳牟缓核捎没谌旧錎检测的种属鉴定方法也很难实现这类样本的种属鉴定。对这类检材,由于线粒体诿扛鱿赴哂懈呖奖数的特性,使线粒体负醭晌V质艏ǖ奈ㄒ荒0謇丛础R虼耍利用线粒体愿髦指芎徒到馍镅Ъ觳慕兄质艏ǔ晌D壳法医学种属鉴定研究与应用的方向睁本课题旨在建立一种能够区分人源性和非人源性南吡L春侠┰黾际酢U庀罴际醢ǘ韵吡L錎的两个基因和的同时扩增。虻囊锷杓莆@┰鋈撕统<锏共有序列,作为扩增体系的阳性内对照;而囊锸钦攵匀死郉特异性设计的。,用抗凝。陈旧检材为刑事案件现场遗留的血痕,侦察员或法医在现场提取检验完毕后,在实验室保存的血纱布4媪、、年的陈旧血痕各研究的动物包括猴、猪、狗、鱼、鼠、豚鼠、兔、马、鳝鱼、蛙、鸡、鸭、羊、牛等十四种动物,收集其血液扛鲋掷嗳∪龈鎏,把其制成纱布斑痕。例网川大学碗畚膄法巨学田力
对这十四种动物的线跠序列进行同源性分析。。酆厦北京天为时代生物有限公司,国产琩,瑞典鞍酌窴/拦,丙烯酰胺治龃浚国产撞嫠ū0鹗,,瑞典鹚分析纯,国产跛分析纯,国产珿甊⑷ダ胱蛹柞0公司,美国缂ɑ撼逡荆拦,液体胶公司,,美国咚倮胄幕荆国〈病⑺∠国产珹遗传分析仪公司,美国傻蛞埔浩吒德国克低ü,超纯水系统方法崛用抗凝的外周血用法提取具体步骤见附录;纱布血痕崛【捎梅右宦确路具体步骤见附录。.锷杓首先进入一个基因