实验八高效液相色谱法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量
目的要求
练****使用高效液相色谱仪
学会用外标法定量分析
二、实验原理
外标法可分为外标一点法、外标二点法及标准曲线法。当标准曲线截距为零时,可用外标一点法进行定量。利用高效液相色谱法进行分离双黄连口服液中的黄芩苷,在λmax274nm处进行检测。在药物分析中,为了减小实验条件波动对分析结果的影响,采用随行外标一点法定量,即每次测定都同时进对照品与供试品溶液。
三、仪器与试药
、超声波提取器、分析天平、微量注射器、ODS-C18反相色谱柱、容量瓶(25ml,50ml)
(中国药品生物制品检定所)、双黄连口服液(三精制药)、甲醇(色谱纯)、冰醋酸(A·R)、双蒸水。
四、实验内容与步骤
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水-冰醋酸(50:50:1)为流动相;检测波长为274nm。理论塔板数按黄芩苷峰计应不低于1500。
精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量,加50%,0. 45μm滤膜滤过,即得()。
精密量取本品1ml,置50ml量瓶中,加50%甲醇适量,超声处理20分钟,放置至室温,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,0. 45μm滤膜滤过,即得。
分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。本品每1ml含黄芩以黄芩苷计不得少于8mg。
五、思考题
1、HPLC中常用的定量方法有几种?外标一点法有何优缺点?
2、紫外检测器的优缺点是什么?
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