凝胶基片的制备与应用研究.pdf

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凝胶基片的制备与应用研究
周升平王欣荣 9 秦胜营林志新刘建华"
(上海交通大学生命科学技术学院,上海$%%$4%)
摘要在 I 处理的玻片上交联聚丙烯酰胺凝胶层( ),戊二醛活化。与末端氨基修
******@BE3,@)=B- !#00 J !#00 J $%!0
饰的寡核苷酸片段共价结合制成芯片。这种芯片能够区分液相中序列不同的 7K3& 标记的目标核酸。与平面基片
相比,凝胶基片具有背景低、固定探针量高、杂交时间短的优点。将细胞因子 LM34、LM3#、LM35、LM3;、N+O、L3&%" 和
’?O< 的单克隆抗体加样于凝胶基片上制成蛋白质芯片,对乳腺癌患者和正常人的血清进行检测,发现乳腺癌患者
细胞因子 LM34、LM3#、L3&%" 和’?O< 的表达量高于正常人的表达量,对临床诊断具有重要的参考意义。
关键词聚丙烯酰胺凝胶,三维芯片,寡核苷酸微阵列,蛋白微阵列
中图分类号 P8! 文献标识码 N 文章编号!%%%3&%5(! $%%&)%#3%#;;3%#
基片的制备在生物芯片的研制中具有举足轻重材料与方法
的作用。基片的研制主要是围绕制作成本、探针固!
定的密度、荧光背景以及应用前景开展工作。早期!"! 材料
的芯片是将核酸或蛋白固定在尼龙膜上,尼龙膜荧玻璃片基(;500 J $#00 J !00)购于 O()E ,-=)
光背景较高表面多孔、具有渗透性,所需的试剂体积
公司。寡核苷酸片段由宝生物公司合成。7K&3ET:U
较大。目前较常用的玻璃基片或硅基片[! Q 4]虽然表
和 ******@BE3V@)=B- 来源于 UC=20=G@= H@(/-GC 公司。细胞
面无渗透性,样品消耗少,但是单位截面积的基片表
因子单克隆抗体由 U-******@B3-)0-2 公司王长城博士提
面所固定的探针量有限。供。生物素标记的细胞因子抗体购自
三维凝胶芯片[# Q !4]是利用活化的聚丙烯酰胺凝
I-V-=2GCXR-Y-)(.0-B/ 公司,荧光标记 7K3& 链亲和素
胶层作基质来固定寡核苷酸、R+N、蛋白质以及其它蛋白购自安法玛西亚公司。乳腺癌病人的血清来自
[ ]
的复合物; 。也有用丙烯酰胺单体与#S丙烯酰胺修上海市长宁区妇幼保健院。正常人的血清来自上海
饰的寡核苷酸在硅化玻璃板上共聚合而将寡核苷酸
市血液中心。R+N 抽提试剂盒购自赛百盛公司。&3
固定在凝胶层上[!4]。与平面芯片相比,三维凝胶芯
氨基丙基三乙氧基硅烷购于,***@Z0= 公司。其它化学
片具有稳定、荧光背景低、检测灵敏度高、杂交时间试剂购自中国医药集团上海化学试剂公司。芯片点
短、单位截面积固定探针量多的优点[5,;]。可以应用
样仪为 O[, 4!; N22=K-2,扫描仪为 O[, 4!8 N22=K
于基因诊断[5]、多态性分析[!$]、免疫测定、受体配体
3 ,G=BB