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转氨酶转氨基作用的鉴定.ppt

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文档列表 文档介绍

用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用
二、基本原理
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中,是体内氨基酸代谢的
重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化,此酶催化氨基酸的
α-氨基转移到另一α-***基酸上。各种转氨酶的活性不同,其中肝
脏的谷丙转氨酶(Glutamic Pyruvic Transaminase ,GPT)活性较
高,它催化如下反应:
α—***戊二酸+ 丙氨酸 GPT 谷氨酸+ ***酸
本实验以丙氨酸和α-***戊二酸为底物,加肝匀浆保温后,用纸层析
法检查谷氨酸的出现,以证明转氨基作用。
一、实验目的
掌握纸层析法鉴定转氨酶转氨基作用的原理和方法

2支试管
测定管①
对照管②
肝匀浆0. 5ml
ml
-*** ml
pH ml
肝匀浆0. 5ml
37℃保温,1小时
三、操作步骤
+ ml, 研成匀浆

加热
沸水浴中煮5分钟
离心2000rpm 5分钟
上清液供层析用

丙氨酸液2
谷氨酸液4
测定液1
对照液3
1
2
3
4

%茚三***溶液,
用吹风机热风吹干,可见出现同心弧状色斑,用铅笔
圈下各色斑。比较各色斑的位置及颜色深浅,并算
各色斑的Rf值,以此判定结果。
?它们的临床意义是什么?
?为什么?
?
思考题

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