pcr技术及其应用.ppt

第八章 PCR技术及其应用
PCR技术的建立
Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想—“修复复制”
但由于测序和引物合成的困难,以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能,所以,Khorana的设想被人们遗忘了……
1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现
Mullis的构思
引物
引物
DNA聚合酶
DNA聚合酶
特定DN***段
94℃变性
50-65℃退火
XX℃延伸
94℃
55℃
37℃
Taq DNA聚合酶(thermus aquaticus)
酶活性(%)
温度(℃)
40 50 60 70 80 90 100
100
80
60
40
20
1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶(Taq)引入了PCR技术
72℃
94℃
55℃
PCR循环
Kary B. Mullis
<<The Unusual Origin
of the Polymerase Chain Reaction>>
1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年
Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。
“我不大喜欢动手,我宁肯不动手,我不喜欢做费力的事。作为一个发明家,重要的一点是为解决某些问题而尽力设计一个简捷的动手方案。”这是PCR的发明者Mullis在1991年对《研究与发展》杂志(R&D)记者说的一番话
第一节 PCR技术原理和工作方式
第八章 PCR技术及其应用
一、PCR的基本原理
类似于DNA的体内复制
首先待扩增DNA模板加热变性解链,随之将反应混合物冷却至某一温度,这一温度可使引物与它的靶序列发生退火,再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸
这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环,PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。