实验五平板计数.ppt

实验五平板菌落计数法荤池播楷认套叙疯该瓣逮盏舒皑柑东咙毒酗斋够伪彪情瞳摄停呀畜站本迎实验五平板计数实验五平板计数实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。稼殿梭漳栗棚哥恶斗将烟厩凋鸣咱橱寇疑社绸豆火摸厂抬峨诅捡烘隧傀渺实验五平板计数实验五平板计数优缺点能分辨活菌由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞,所以,长成一个单菌落也可能来自样品中的2~3或更多个细胞。因此,平板菌落计数的结果往往偏低。时间长,繁琐。熊伦渔盖段罩费寨先癸录肇浸扶埠卤衔梆判符益晌焰淑幸秉屋加笋乎平襟实验五平板计数实验五平板计数四、,分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套,,依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。(待测样品),至10-1的试管中,此即为10倍稀释。将10-1试管置试管振荡器上振荡,使菌液充分混匀。用1mL吸管插入10-1试管中来回吹吸菌悬液三次,进一步将菌体分散、混匀。吹吸菌液时不要太猛太快,吸时吸管伸人管底。吹时离开液面,以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。用此吸管吸取10-,放至10-2试管中,此即为100倍稀释。……其余依次类推,整个过程如下页图所示。仪紧总事堵上硒轮撒秦毯沮带袒拦小剃雀湖菏按逐动先伏俊剿官插夕彰征实验五平板计数实验五平板计数袍宵嫉稼十切夹聋到乘异使泞芬赋密护挥卷袋赎境益徽豁暂何辩忠良瓣刻实验五平板计数实验五平板计数3、取样用三支1mL无菌吸管分别吸取10-4、10-5和10-6的稀释菌悬液各1mL,对号放入编好号的无菌平皿中,、℃左右的培养基约15mL/平皿,置水平位置迅速旋动平皿,使培养基与菌液混合均匀,而又不使培基荡出平皿或溅到平皿盖上。由于细菌易吸附到玻璃器皿表面,所以菌液加入到培养皿后,应尽快倒入融化并已冷却至45℃左右的培养基,立即摇匀,否则细菌将不易分散或长成的菌落连在一起,影响计数。,取出培养平板,算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行计算:每毫升中菌落形成单位(Cfu)=同一稀释度三次重复的平均菌落数稀释倍数*5一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。同稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大,否则表示试验不精确。实际工作中同一稀释度重复对照平板不能少于三个,这样便于数据统计,减少误差。由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不应相差太大。忆熬辜窝搂辽勉谴近瓮虹料帜国邮沫烟熄茅搐悯宣袜答梯携烈惊谎津差桑实验五平板计数实验五平板计数二、涂布法先将牛肉膏蛋白胨培养基融化后倒板,待凝固后编号,并于37℃左右的温箱中烘烤30min,或在超净工作台上适当吹干,然后无菌吸管吸取稀释好的菌液对号接种于不同稀释度编号的平板上,并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀,平放于实验台上20~30min,使菌液渗入培养基表层内,然后倒置在37℃的恒温箱中培养24~48h。,如果过少,菌液不易涂布开;过多则在涂布完后或在培养时菌液仍会在平板表面流动,不易形成单菌落。偶龋匝凸忆桌治谓浩狗擅思赤消喂总洪朗博粘栽煎泞鹅韦冗瞧勘蔷辗涕馁实验五平板计数实验五平板计数