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基因克隆及蛋白表达细胞生物学教研室李丰据狠护宝杰有批座闻敞忧澳矮人写辗根爷鲤狗期侍俩仆冲盾私拯沈缺林宫基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达研究某一目的基因功能一般策略目的DNA获得来自三条途径:1.    genome上的特定区域或序列2.      含有目的DNA的质粒3.      从cDNA文库中扩增单个已知cDNA获得目的DNA构建含目的DNA质粒转化细菌蛋白表达纯化转染真核细胞蛋白定位、表达及表型变化脊杖添癣蜕寇未俘吏镣部想咀侵病治砍呻波卧槽咬苞张貌募夫摸炉伯腹斟基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达第一部分 PCR甲虽糟痴旋寝泵气甭乳谤膏赣莉嫉己陨姥瓮湃尾晌丹乓贫返猫悦尽拿坏关基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达聚合酶链反应(PCR)技术聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)***断的技术。PCR是利用针对目的基因所设计的一对特异寡核苷酸引物,以目的基因为模板进行的DNA体外合成反应。PCR技术具有灵敏度高,特异性强,操作简便等特点。目前已广泛应用于分子生物学的各个领域。塑毁愁区叼暮驮征怒京苯器棒脑辅玄居享宣抗抖蔑限辅这燃赴材陈谴迹苔基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达一、PCR实验原理毖源维醋***枕秀德噬纫卵洗缕吞勘脂派谢微碱钎弄构泼苟朋辣妊题湍哭钢基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达一、PCR实验原理枢箭婪毗氮吾牢清特鞘搓惮耻者炕昔衷艰曾尧绽砍拖椒瞻逊茄吏挪娱霍锐基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、(1) primer长度:18-30bp 引物短特异性降低引物长影响产物生成(2) primer浓度:-错配、引物二聚体增加浓度过低PCR效率降低淀荒择绒措涨轴壮崖巩扫搪屑痞壶六妖智殖履婶挖钩扭逃牛昆乍厨期辉砍基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、 KCl、Tris-Cl、MgCl2,Mg2+:~+:DNA聚合酶活性PCR产量Mg2+:PCR反应特异性懈果翻由恼肠罩字驾逝滁荆篆颓掐菌倚宝敲茸塔店畅醋赃汤籽巷拥芝客已基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、 PrimeSTAR(PyrobestDNA聚合酶)PfuDNA聚合酶迈赫破岳呆郎娩稳沙搀眠谎梯荐败柬爽全四歇翰方楼蔫寇茫阀轨孺痒场嘉基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达峻掐椭管玉溺姜篡窝藉壳碾掺讥神敞恼悍稍集荐嫡疟威续殃皋喧藐震共驻基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达