BCA法与考马斯亮蓝法.doc

Bicinchoninicacid(BCA)法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与Lowery法蛋白定量相似,即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比,BCA蛋白测定方法灵敏度高,操作简单,试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳,并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比,BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。蛋白测定是在生命科学研究中最广泛应用的方法之一。在蛋白提纯,电泳,免疫分析,细胞生物,分子生物和其他研究应用时评估蛋白浓度是必需的。虽然目前有各种不同的蛋白测定方法,但仍然还没有一种测定方法被认为是广泛适合于所有的应用要求。每种方法都有它的优点和限制。一般来说,研究中经常需要用到一种以上的蛋白测定方法以排除一些未知的物质的干扰。大多数蛋白样品可通过比色测定法定量。在典型的蛋白测定中,化学试剂加入到蛋白样品溶液里产生颜色变化,这一变化可由分光光度计或酶标仪检测,并与已知浓度的蛋白标准曲线作比较。博士德为大家提供两种蛋白测定手段,每种都有其独特的优点。如果样品数量较多,可以同时使用两种测定用酶标仪自动检测。当你选择一种蛋白测定方法时需要考虑两个因素:massie法(Bradford法):原理:在酸性条件,蛋白质与考马斯染料G-250结合,颜色从棕色变为蓝色,在595nm处检测吸光值然后与标准曲线对比,即可计算出待测蛋白的浓度。BCA法:原理:在碱性条件下,蛋白将Cu++还原为Cu+,Cu+与BCA试剂形成紫色络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。现对这两种方法进行比较:一、实验材料:细胞总蛋白提取试剂盒(AR0103)M231bca蛋白定量试剂盒(massie改良增强型蛋白质定量试剂盒(AR0145)二、massie法:(10mg/支)用生理盐水或PBS稀释成2000ug/ml,1000ug/ml,500ug/ml,250ug/ml,125ug/ml,,,。。。(溶液A),。,再用标准曲线判断出样品的蛋白浓度。BCA法:,充分混匀。(10mg/支)用生理盐水或PBS稀释成2000ug/ml,1000ug/ml,500ug/ml,250ug/ml,125ug/ml,,,。。。,。