细胞培养(张华屏).ppt

细胞培养基本技术分子生物学实验室张华屏主要内容概述体外培养细胞的生长和增殖特点培养细胞所用的实验用品常用的培养器皿及其清洗消毒与灭菌液体的配置(培养基,平衡缓冲液,消化液等)细胞的处理(传代,冻存和复苏)细胞计数及活力测定培养物的污染及防止细胞培养从体内组织取出细胞,在体外模拟体内的环境下,使其生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物可以是单个细胞,也可以是细胞群。细胞培养目的与用途1、科学研究:药物研究开发与基础研究2、:如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。:如病毒性疫苗的研究与开发(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。:如干扰素研究与开发,细胞生长因子研究与开发等。:生物活性多肽研究与开发,人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。:包括诊断用单克隆抗体,治疗用单克隆抗体。基础研究(1)药物作用机理(2)基因功能(3)疾病发生机理2、生物制药(1)疫苗生产:如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。(2)基因工程药物生产:如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素、粒细胞生长因子、胸腺肽等.(3)诊断用和药用单克隆抗体生产.(4)细胞工程药物生产:生物细胞内的一些生物活性多肽,、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖最重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。2、优质血清目前,大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重要的成分之一,含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。3、无菌无毒的细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物质污染,或者自身代谢物质积累,可导致细胞中毒死亡。因此,在体外培养细胞时,必须保持细胞生存环境无菌无毒,及时清除细胞代谢产物。4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定适宜的温度。5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳。体外培养细胞的分型(一)贴附型:大多数培养细胞属于贴附生长,贴壁依赖性细胞(二)悬浮型;见于少数特殊的细胞,如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形,不贴于支持物上,呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。