安捷伦液相常见问题.doc

症状类型可能的原因解决方案基线噪声大随机性-污染物积聚冲洗柱;净化样品;使用HPLC级溶剂连续性-检测器灯故障更换紫外灯(寿命为1000小时)偶然性-外部电气干扰使用LC系统专用稳压器样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6双峰样品量过大进样量应为流动相进样量的1/;重填柱进样器流路不通畅更换进样器转子柱头有空隙使用填料或玻璃珠填充柱顶部柱上样品超载使用更高负载量的固定相;增加色谱柱内径;减少样品量单峰-存在干扰性组分净化样品;预分离拖尾峰开始出双峰请参见双峰存在未扫的死体积减少接头的数量;确保进样器密封垫紧密;确保接头正确固定碱性化合物-硅醇相互作用换成聚合物固定相碱性物质-硅醇相互作用使用更强的流动相或添加竞争碱(例如,三甲***)硅胶基-柱降解使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻峰展宽进样量过大降低进样溶剂的强度以集中溶质进样阀中的峰扩散在进样前/后引入气泡以减少扩散数据系统的采样速率过低增大采样检测器时间常数低调节时间常数使之与峰宽匹配流动相粘度过高提高柱温检测器流通池容积过大使用尽可能小的池容积(系统中无热交换器)注射器体积过大减少进样量保留时间长使用梯度洗脱或较强的流动相压力波动单向阀泄漏更换单向阀泵密封垫泄漏更换泵密封垫微粒积聚过滤样品;在线过滤器;过滤流动相压力渐增微粒积聚过滤样品;在线过滤器;过滤流动相水/有机系统-缓冲液沉淀测试缓冲液-有机混合物;确保兼容性保留时间超出总渗透体积体积排阻-特异性相互作用添加流动相改性剂或更改溶剂保留时间不断变动柱温不断变化使柱恒温;绝缘;保证实验室温度恒定平衡时间不足以适应梯度洗脱要求,或梯度洗脱流动相起变化确信在溶剂改变或梯度结束后至少10个柱容积通过色谱柱流动相组分选择性蒸发减少氦气的剧烈脱气;保持溶剂贮器盖好;制备新的流动相缓冲能力不足用>20mM浓度的缓冲液在线流动相混合不一致保证梯度系统输送恒定组成;与手动制备流动相核对污染积聚冲洗色谱柱以去除污染物最初几次进样-吸附在活性部位用浓样品进样冲洗柱,使其处于正常状态保留时间逐渐缩短流速在增加检查泵以确保正确;否则需重调柱上进样超载减少样品键合固定相的流失保持流动相pH值在2-,更换泵密封垫,检查泵的涡流和气泡硅胶填料的活化点使用流动相改性剂键合固定相的流失保持流动相pH值在2--样品在样品池或柱中被吸附;自动进样器;流路阻塞用浓样品处理样品池/柱自动进样器流路阻塞检查流量情况,确保无阻塞现象进样器样品定量管未充满确保样品池中已充满样品在样品制品时有关的样品流失用内标法在制备样品,优化样品制备方法柱平衡时间减慢(离子对现象)——压力波动可能原因:溶剂进口过滤芯堵塞;溶剂未脱气;泵的密封垫老化;出口单向阀失效;主动阀失效。最常见原因:——压力过低可能原因:溶剂进口过滤芯堵塞;连接管路泄漏或其它备件(泵头密封垫);溶剂或流速改变;主动阀失灵;四元比例阀失灵;单向出口阀失灵;色谱柱失效(固定相流失)。——压力过高可能原因:柱子进口过滤芯被污染;PURGE(排气)阀过滤芯被污染;色谱柱被污染;连接管路,尤其是针座毛细管堵塞;进样器旋转密封阀被堵塞;——基线噪音是—检测器?基线噪音——停泵——噪音是否依然存在---否—泵或流动相?其它要考虑的问题:是否改变了流动相的组成?是否改变了检测波长?在你的仪器上使用的最后的流动相是什么?流动相是否相溶?流动相是否干净?如何排除流动相中的气泡?如何排出流动池中的气泡?避免流动相中产生气泡的最佳方式是将流动相经脱气装置进行脱气。如果没有脱气装置,则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中的背压,但必须注意不要超过流动池的最大压力,否则会造成流动池漏液或流动池损坏。如果流动池中出现气泡,则先摘下色谱柱,用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。将异丙醇以较大的流速注入流动池。直到基线上看不到毛刺为止。气泡就应该清除掉了。如何减少基线噪音?无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱,对样品做合适的前处理以避免污染,并使用HPLC级别的溶剂。连续噪音有可能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵,请先关泵停掉流量,监测基线。如果此时基线平稳,则噪音可能与泵有关系。