肌肉组织的氨基转换作用实验报告.docx

肌肉组织的氨基转换作用实验报告实验报告课程名称:生化实验甲指导老师:成绩:__________________ 实验名称:氨基移换反应及其产物的鉴定实验类型:同组学生姓名: 一、实验目的和要求二、实验内容和原理三、实验材料与试剂四、实验器材与仪器五、操作方法和实验步骤六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析八、讨论、心得一、实验目的和要求 1、学****鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理; 2、学****纸层析的原理和操作技术。二、: 在氨基移换酶和谷草转氨酶的活性最强。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性较高。 GPT催化下的转氨基反应为: L-谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富,活性高,催化L-谷氨酸氧化脱-NH2,加碘乙酸能抑制其活性,从而可以保护氨基移换反应的产物L-谷氨酸。本实验用纸层析法,检查由丙氨酸和α—***戊二酸在肝细胞谷丙转氨酶的不同来分离混合物的一种技术。层析溶剂是由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上羟基具有亲水性,因此吸附一层水作为固定相,而通常把有机溶剂作为流动相。进行分离时,由于被分离物质的组分在两相中的分布不同,随着流动相的移动,物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配,从而造成不同组分移动的速度也不相同。易溶于流动相中的组分移动快,在固定相中溶解度大的组分移动慢,于是得到分离。用滤纸层析法分离氨基酸,是根据氨基酸样品的R基团的化学结构或极性大小的不同,将样品氨基酸溶解在适当的溶剂中,点样在滤纸的一端,再选用适当的溶剂系统,通过毛细现象向另一端展层,展层完毕后,用茚三***作为显色剂,即可得到氨基酸样品的分离图谱。 ***的显色原理: 氨基酸+茚三***类紫红色复合物三、实验材料与试剂 1、实验材料动物肝脏(牛蛙肝或猪肝) 2、实验试剂⑴/L磷酸缓冲液; ⑵/Lα-丙氨酸; ⑶/Lα-***戊二酸; ⑷/L谷氨酸; ⑸展层溶剂-酚溶液:水饱和酚:冰乙酸; ⑹10%三***乙酸; ⑺%碘乙酸; ⑻显色剂。四、实验器材与仪器⑴研钵; ⑵试管及试管架; ⑶恒温水浴箱; ⑷铅笔、尺和圆规; ⑸毛细管; ⑺剪刀和镊子; ⑻电吹风; ⑼滴管; ⑽康氏皿; ⑾喷雾器; ⑿烘箱。五、实验操作方法和步骤 1、转氨酶液的制备取新鲜牛蛙肝或猪肝约3g,剪碎用研钵将肝脏碾碎,加3ml磷酸缓冲液迅速碾磨,加9ml磷酸缓冲液,用两层纱布过滤,收集浆液或滤液即得转氨酶提取液备用。 2、氨基移换反应取4支洁净、干燥的试管,按下表操作 3、层析⑴准备: ①取新华定性滤纸一张,找出圆心,用圆规画一直径2cm的细圆圈,并按图1用铅笔作出点样位置。找出圆心,用铅笔尖在圆心处截一小孔后方可再次点样,点样直径不超过。⑶展层、显色将下端剪成须状,卷成的“灯芯”,然后将上端插入层析滤纸圆心处的小孔中,平放在盛有展层溶剂的康氏皿中,使“灯芯”下端须状浸入展层溶剂中,再在滤纸上盖上另一康氏皿。展层剂沿灯心上升到滤纸,再向四周扩散,待溶剂前沿距康氏皿外槽内缘(约需半小时),取出滤纸,用镊子拔出灯心,滤纸用电吹风吹干,再用喷雾器向滤纸均匀喷洒%茚三***-乙醇溶液,用电吹风热风吹干或放入烘箱中显色3min。预计结果六、结果分析由实验结果可知,1与3所点的样显然受到了谷氨酸的污染,原因可能为:1、点样的时候用的毛细管可能受到了污染;2、滤纸在点样之前可能碰到了桌面上的一些小液滴。七、讨论、心得 1、避免污染滤纸,不要用手接触。 2、点样时,毛细管与滤纸轻微接触,不要留下痕迹。 3、喷茚三***显色时,需要戴手套,免得手部被染色。 4、实验过程中尽量保持台面干净,免得污染滤纸。脱氨基作用脱氨基作用,细胞内从有机化合物分子上除去氨基的酶促反应, 是机体内氨基酸代谢的第一步。脱氨基作用有氧化脱氨,转氨,联合脱氨和非氧化脱氨等方式。其中以联合脱氨基最为重要。氧化脱氨作用基作用普遍存在于动植物细胞中,动物的脱氨基作用主要在肝脏进行;非氧化脱氨基作用见于微生物,但并不普遍。生物中许多含氨基的化合物在分解代谢过程里几乎都有这类反应。这些化合物包括各种氨基酸、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶及它们的衍生物。脱氨基作用是由各种脱氨酶催化的,反应产物是对应的***基化合物。在氨基酸的分解代谢中,L-谷氨酸的氧化性脱氨作用很重要。因为在许多生物中只有谷氨酸一种氨基酸能进行氧化性脱氨,催化这一反应的谷氨酸脱氢酶的专一性又较高。现在认为,至少在动物体内,大部分氨基酸是通过氨基转换和谷氨酸氧化脱氨的联合作用脱氨的,也可通过此联合作用的逆反应合成某些氨基酸。氧化脱氨基作用是指氨基酸在脱氨基时伴有氧化过程。催化氧化脱氨基的酶有氨基酸氧化酶和L-谷氨酸脱氢酶。L-谷氨酸脱氢酶是以NAD+为辅酶的不需氧脱氢酶,其在体内分布广、活性强,能催化L-谷氨酸氧化脱氨,生成α