红细胞膜蛋白的分离与电泳检测.doc

Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;mercialuse实验七、膜蛋白质的分离与鉴定(综合性实验8学时)。。实验用品一、仪器超速离心机、平板式电泳架\电泳仪\移液器\离心管\注射器、长针头注射器(50m1)、水浴锅、微量注射器(100μl)、parafilm纸封、各类吸管、量筒、烧杯等。二、(phosphafebuHersaline)5mmol/LNa2HP04(Mw=142)5mmo1/LNaH2P04(Mw=140)145mmo1/LNaCl(Mw=)()Na2HpO45mmo1/LNaH2P045mmo1/×上样缓冲液,10ml1MTris-HCL()…%glycerol…25%%SDS…2%2-mercaptoethanol…%bromophenolblue…%H2OStableforweeksintherefrigeratororformonthsat-20℃.实验方法一、血影膜制备方法实验步骤见图。;(PBS),再以1000r/min离心5min,温度为4℃;:弃去上清液和中间的一层淡黄色帽状物(bullycoat),在上清液中主要包括血清和PBS成份,帽状物中包括白细胞和血小板等,只留下最下层的压积的红细胞(packedRBC);~2次,洗涤被压积的红细胞;,去上清液,只留下被浓缩的RBC部份;(20倍的的磷酸盐缓冲液,并将其与RBC混合均匀,在常温下(20℃)静置20~25min进行低渗处理,然后置入高速离心机内(4℃)以10000~15000r/min离心15—20min。:弃上清液和最下层的一块粉红色纽状沉淀,这时在上清液中主要包括PBS和血红蛋白,在最下层的钮扣状沉淀中含有大量的蛋白酶,要清除干净,否则会影响以后的电泳结果,只留下中间的一层血影膜。,重复(按6)洗涤1~2次,直至血影膜呈乳白色,去上清液后,即为所制备的样品。,放冰箱保存,待电泳。。,说明膜蛋白质分离方法的几个技术关键。以下无正文仅供个人用于学****研究;不得用于商业用途。 толькодлялюдей,которыеиспользуютсядляобучения,исследованийинедолжныиспользоватьсявкоммерческихцелях. Forpersonaluseonlyinstudyandresea