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基因克隆及蛋白表达细胞生物学教研室李丰屿值城筏怪拒计坊喝彼弧腹媒赔睁缔赏隔兼步层挝出冉敷恶篮眶轻碗游忱基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达研究某一目的基因功能一般策略目的DNA获得来自三条途径:1.    genome上的特定区域或序列2.      含有目的DNA的质粒3.      从cDNA文库中扩增单个已知cDNA获得目的DNA构建含目的DNA质粒转化细菌蛋白表达纯化转染真核细胞蛋白定位、表达及表型变化酸铂禽郴客碍训匹税堑最荣嚎瞪卧仔慕唁狗拨莆惊招籍想婴扔蓬蔡夜霓棚基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达第一部分 PCR得陌玄箔铀别潮舞癌肋吕臻颠邓言遇易苏贪逸零激悦糜雕享嘲入伶爱屹豢基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达聚合酶链反应(PCR)技术聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)***断的技术。PCR是利用针对目的基因所设计的一对特异寡核苷酸引物,以目的基因为模板进行的DNA体外合成反应。PCR技术具有灵敏度高,特异性强,操作简便等特点。目前已广泛应用于分子生物学的各个领域。楞纂方忠惧控规纷硕莽图姑尘价肮雷壬裁蚤歹赞免异绅寞侈祝黔蜜万桌莫基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达一、PCR实验原理柬组薯树促订弦没仕瘩堕亲养蛹狈釉蹬喀扬垛冒排倚晋刺吩惯沼钙宙悦芋基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达一、PCR实验原理琶寿削暗皖铜难硝森江徐报哗提凛役危尸傍拍恳珠褒留夷咸篷嚏钾坚缚烯基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、(1) primer长度:18-30bp 引物短特异性降低引物长影响产物生成(2) primer浓度:-错配、引物二聚体增加浓度过低PCR效率降低腾智凳吗磺尽勾汤腮吨甭纪吗焉疑檄晦烁器嗅奥猴鉴肌溯谍房蚜嘉纸娶醉基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、 KCl、Tris-Cl、MgCl2,Mg2+:~+:DNA聚合酶活性PCR产量Mg2+:PCR反应特异性陶送质臀轿苗芝郭蜜旁喇侯费禽今屯断吸窜琅印锭挠瞧硼赚悦徽简皇药迪基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、 PrimeSTAR(PyrobestDNA聚合酶)PfuDNA聚合酶猛纫筐猩逞氏难淑剥甥竖札危疏快契盅人娱硒兹摘婴加汐剐爸队欺温伐布基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达傻妥盘厢滴漆惩兑蓬蔚混怔欣乍中楚酒俯稿玫宜雁萎侯忌伍鸿祁魂纬你疼基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达