血管内皮细胞线粒体膜电位与缺氧及血管紧张素Ⅱ的相关性.doc

血管内皮细胞线粒体膜电位与缺氧及血管紧张素Ⅱ的相关性
作者:刘玉,胡建林,李鸣皋,马贵喜,韩磊,黄友
STRONG【摘要】/STRONG目的观察缺氧及血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)对血管内皮细胞(VEC)线粒体膜电位的影响。方法建立VEC缺氧损伤模型;实验设为空白对照组、缺氧组、Ang-Ⅱ作用组、缺氧加Ang-Ⅱ作用组等四组。细胞经过Rhodamine123负载后,用激光共聚焦显微镜测定VEC内Rhodamine123的荧光强度代表线粒体膜电位。结果VEC分别经过缺氧及Ang-Ⅱ损伤后,线粒体膜电位明显降低();缺氧与Ang-Ⅱ联合作用可引起VEC线粒体膜电位较单纯缺氧或单纯Ang-Ⅱ作用进一步降低()。结论缺氧及Ang-Ⅱ可引起VEC线粒体膜电位明显降低,造成VEC损伤。
STRONG【关键词】/STRONG缺氧;血管紧张素Ⅱ;线粒体膜电位;血管内皮细胞
Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofhypoxiaandangiotesinⅡ(AngⅡ)onmitochondriamembranepotential(MMP)ofvascularendothelialcells(VECs).MethodsHypoxia-inducedinjurymodelofVECswasestablished,andthenculturedVECsweredividedintofourgroups:controlgroup,simplehypoxiagroup,simpleAng
Ⅱgroup,hypoxia+AngⅡgroup,,decreaseinMMPwasobservedeitherinthehypoxiagrouporintheAngⅡgroup().Thischangewasclearerinthehypoxia+AngⅡgroupthaninanyoftheothergroups().ConclusionHypoxiaorAngⅡcouldsignificantlydecreaseMMPofVECs,andinjureVECs.
Keywords:hypoxia;angiotesinⅡ;mitochondriamembranepotential;vascularendothelialcell
血管内皮细胞(VEC)是血液和组织间进行代谢交换的屏障,可以合成和分泌多种生物活性物质,在调节血管收缩舒张功能、维持内环境稳定等方面具有重要意义。缺氧是导致VEC损伤的极为常见的病理因素,血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)是肾素-血管紧张素系统直接作用于血管床使血管收缩的重要的血管活性肽,在原发性高血压、动脉粥样硬化和心衰等疾病的发生fazhan发展过程中起重要作用[1~2],在本研究中,通过培养的人大动脉血管内皮细胞分别观察了缺氧和Ang-Ⅱ对线粒体膜电位的影响,并进一步探讨缺氧和Ang-Ⅱ引起血管内皮细胞损伤的内在机制。
STRONG1材料与方法/STRONG
-Hanks液(HyClone,美国),人大动脉血管内皮细胞(CBI公司提供的人大动脉血管内皮细胞体系),血管内皮细胞培养液及血管内皮细胞生长因子(CBI公司配套提供),胰蛋白酶(华美生物工程公司),二甲基亚砜(美国BIO-RAD公司),Rhodamine123荧光探针(美国BIO-RAD公司),Ang-Ⅱ(Sigma公司),缺氧用混合气体(95%N2,5%CO2,北京市特殊气体供应公司),35mm培养皿(丹麦NUNC公司),细胞培养箱(),超净工作台(北京冠鹏净化设备有限公司),光学显微镜(Olympus,Japan),激光共聚焦显微镜MRC-1024(美国BIO-RAD公司)。

,常规复苏后,将细胞加入含有LSGS的Medium200培养基中制成细胞悬液,调整细胞浓度为1×105/ml,取该细胞悬液10ml接种于75cm2的无菌培养瓶中,置于37℃、湿度95%、含体积分数为5%的CO2孵箱中培养,隔天更换培养液,细胞70%~90%融合时用1g/L胰酶-乙二胺四乙酸(EDTA)消化传代,细胞传代时的接种浓度为1×105/ml。当细胞传至第三代时,将细胞接种于35mm培养皿中继续培养,观察细胞70%~90%融合后,准备