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密级内部研究生学号


吉林大学
硕士学位论文



超嗜热脂肪酶的分离纯化及酶学性质
(要求黑体三号字)

(英文论文题目)
(要求 Arial 体小三号)






作者姓名: 解桂秋
专业: 微生物与生化药学
导师姓名曹淑桂教授
及职称

论文起止年月: 2000 年 9 月至 2002 年 6 月
提要
本论文首先通过搜索预测为脂肪酶,且为单个结构域蛋白。
然后预测了该酶的二级结构,以及与其它来源的脂肪酶、酯酶和乙酰氨基肽酶进
行了同源性比较,深入探讨了该酶的基本酶学性质,动力学性质以及变性剂诱导
的酶变性时的活力及光谱学性质。
以本室构建的超嗜热脂肪酶的工程菌为产酶菌株,通过分离纯化得到了电
泳纯的超嗜热脂肪酶,经—确定其蛋白分子量为左右,非变性电
泳及活力染色电泳确定其为单聚体蛋白。超嗜热脂肪酶的酶学性质研究
表明该酶的最适作用温度为℃,最适为。此酶的最适底物为对硝基苯

酚辛酸酯, 值为μ为。该酶受胆酸钠盐的抑制,金属离子除
了对其有明显的抑制作用外其它离子对酶的作用较小,非极性表面活性剂对
酶表现出一定的抑制作用,极性表面活性剂完全抑制酶活。该酶具有极强的热稳
定性,在的酶在℃半衰期为小时,在偏碱性条件下稳定。同
时检测了酶在热变性及变性剂诱导的酶变性时的荧光及相应的活力变化。℃热
变性时,随着疏水氨基酸的暴露酶活逐渐降低。不同浓度的盐酸胍和脲对酶的变
性作用程度虽然不同,但结果的趋势是相同的。在盐酸胍浓度小于,脲浓度
小于时,内源荧光的变化不大,而且对酶活的影响也较小;当盐酸胍浓度大
于、脲的浓度大于内源荧光发生红移,而且酶活明显降低。高浓度的变性
剂作用后的酶,不能再恢复其活力。
关键词:嗜热古细菌脂肪酶同源序列分析热稳定性

目录

第一章前言
脂肪酶简介
古细菌简介
超嗜热酶简介
第二章蛋白质的同源序列分析及结构预测
引言
酶的搜索
蛋白结构域搜索
同源性比较
氨基酸组成
二级结构预测
小结
第三章超嗜热脂肪酶的分离纯化
引言
材料与方法
结果与讨论
小结
第四章超嗜热脂肪酶的酶学性质
引言
材料与方法
结果与讨论
小结
总结
参考文献
摘要

致谢


目录
提要ⅰⅰ
第五章前言
脂肪酶简介
古细菌简介
超嗜热酶简介
第六章蛋白质的同源序列分析及结构预测
引言
酶的 motif 搜索 9
蛋白结构域搜索 10
同源性比较 10
氨基酸组成 13
二级结构预测 14
小结 17
第七章超嗜热脂肪酶的分离纯化
引言
材料与方法
结果与讨论
小结
第八章超嗜热脂肪酶的酶学性质
引言
材料与方法
结果与讨论
小结
总结
参考文献
摘要

致谢

第一章前言
脂肪酶简介
脂肪酶全称为三酰基甘油水解酶
是指能在油水界面上水解甘油三酯的酶,它是能催化酯水解
和酯合成的水解酶中最重要的一类。
脂肪酶同酯酶、胆碱酯酶属于进化相关蛋白的同一家族。这一家族涉及真
核、细菌和非活性蛋白等所有领域。目前在这一家族中检测到了三个亚族:一是
族,包括脊椎动物和无脊椎动物来源的胆碱酯酶、真菌来源的脂肪酶、一些酯
酶和某些非活性蛋白;二是族,包括脊椎动物和细菌来源的脂肪酶、脂蛋白脂
肪酶、卵磷脂胆碱乙酰转移酶和来自于双翅目昆虫的无活性的卵黄生成素;三
是激素敏感脂肪酶( : ),包括来源于
的脂肪酶、来源于的乙酰水
解酶、来源于的酯酶和最近报道的人肝脏芳
基乙酰胺脱乙酰酶()等。
脂肪酶广泛存在于动物、植物及微生物界。而微生物脂肪酶一直就吸引了
广泛的重视,这归功于它们的生物技术潜能和它在去污剂工业和立体专一性生物
催化反应中的广泛应用。在微生物脂肪酶的很多研究都集中到了食品的酸败
味道改变上。辨别棕榈油质量的主要标准就是自由脂肪酸的水平。导致脂肪
酸水平升高的罪魁祸首就是棕榈油中的一些脂解真菌。已经从中分离到的真菌有
等。高等脊椎动物脂肪酶仅
有三类组织特异性同工酶:胰脂肪酶、肝脂肪酶和胃唾液脂肪酶,这三类脂肪
酶相互之间关系密切,并且都类似于脂蛋白脂肪酶,水解乳糜颗粒和低密度脂蛋
白中的甘油三酯。
脂肪酶属于丝氨酸酶类,虽然脂肪酶蛋白的