细胞计数板使用技术方法.doc

蒅蚀袆细胞计数板使用方法肀蕿蚀薃莄艿实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。螁莆羈具体操作:,并将盖片盖在计数板。,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。,压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算:羈葿肈细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104蒆蚂莃说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。螈芆肄公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:(长)×(宽)×(高)==1000mm3蒈芈膈蚃薁螄(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液)文档来自于网络搜索艿荿薂肅羀蝿罿膆芈细胞计数板的使用膄蚄膅虿膈芄血球计数板-基本构造薆肃薈血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区。计数区的刻度有两种:一种是计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成。文档来自于网络搜索蒀羅莇蚅蒂薆计数区边长为1mm,则计数区的面积为1mm2,每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后,,,每个小方格的体积为1/4000mm3。文档来自于网络搜索膀肆蚂使用细胞计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。文档来自于网络搜索螃羂蚁细胞计数板-,加无菌水适当稀释(斜面一般稀释100倍),以每小格的菌数可数为度。,在计数区上盖上一块盖玻片。,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴(不宜过多),让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上(不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高),然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。,使细胞沉降到计数板上,不再随液体漂移。将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度。,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个大方格(即100小格)的菌数。如果是25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,还需数中央1个大方格的菌数(即80个小格)。为了保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,在计数时,对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格,本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见下图:即本格中计数细胞为3个。,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次(每次数值不应相差过大,否则应重新操作),按公式计算出每mL(g)菌悬液所含细胞数量。,取下盖玻片,用水将细胞计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存。文档来自于网络搜索蚈袅薇细胞计数板-计数公式袃莃蒅1、16格×25格的细胞计数板计算公式:细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数文档来自于网络搜索莈袇薄1、25格×16格的细胞计数板计算公式:细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数文档来自于网络搜索芅螂膂腿羈蚇血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差,力求准确?莄膁羆血细胞计数的误差分别来源于技术误差和固有误差。其中由于操作人员采血不顺利,器材处理、使用不当,稀释不准确,细胞识别错误等因素所造成的误差属技术误差;而由于仪器(计数板、盖片、吸管等)不够