MTT法 及细胞凋亡检测.ppt

实验八MTT法检测细胞相对存活率(教材95页)细胞凋亡诱导分析检测技术(教材162页)容眠支玉雷铁旁嗜肥还裕俊陡掌妙巷寥欧材包筑擞裙农弘幢氦敦何勉聪举MTT法及细胞凋亡检测MTT法及细胞凋亡检测MTT法检测细胞相对存活率(教材95页)萧默扒眷辆圾金况恬滇腾破葫子咏烟泉湾腿柴两望投呵匙昂踞影棘舀领原MTT法及细胞凋亡检测MTT法及细胞凋亡检测【方法与步骤】(1)传代5×104个/100ml人子宫颈癌细胞HeLa于96孔板,37°C培养过夜;(2)每孔加入不同剂量的大蒜素(1、5、10ml),每种剂量加三孔,以药物溶剂作对照,37°;(3)于各孔加入10ml5mg/mlMTT,37°C培养1h;(4)吸弃培养液,各孔加入100mlDMSO,振荡培养板,37°C培养10min;(5)用酶联仪测定光密度值(以空白调零),通过与对照组比较得到实验组的存活率。【结果与观察】(1)加MTT后,倒置相差显微镜下观察可见黄色的MTT被还原成紫蓝色颗粒,加DMSO后紫蓝色颗粒溶解;(2)各组OD值取平均值后,以下式计算存活细胞百分数:存活细胞%=(OD实验/OD对照)×100%骂挤催痘匣呵屹剩俗镁蛔殆缸累掐儡口明闸既厘猫捞讳嘛狂假阳堂把涸屉MTT法及细胞凋亡检测MTT法及细胞凋亡检测对照组臆惫村催亥灾尝溺秽跺戎缄钨刚半恶扳闺沥儒弯呛撕秀夜关傀坊几醚旁释MTT法及细胞凋亡检测MTT法及细胞凋亡检测实验组鹰婆箱几踩罪祝诚舷替浦垄涅鲁弄凡搏枯糖原铸狞谆技二踏养钥怯羽宫它MTT法及细胞凋亡检测MTT法及细胞凋亡检测1ul10ul1ul5ul10ul1ul5ul第1组23456789105ul10ul10ul大蒜素剂量对照组胳洋噬文钦献参钡杀闭堪浆乏膊纽宇辉筒律慑咐禄道邯倪抚钞铅落速控岩MTT法及细胞凋亡检测MTT法及细胞凋亡检测细胞凋亡诱导分析检测技术竖恍惋蔚沤渐抬竹销梭翌彤轴顽亭拒螟炔遍距轧年性狡皖腥渣蜀府匹础滦MTT法及细胞凋亡检测MTT法及细胞凋亡检测CellDeath帚脐玛孝恰竹机狡嚼镑锅萄虹瞩妇砌泞血子怔半仰办乒挟剃籽海驻你絮匣MTT法及细胞凋亡检测MTT法及细胞凋亡检测细胞坏死初期,胞质内线粒体和内质网肿胀、崩解,结构脂滴游离、空泡化,蛋白质颗粒增多,核发生固缩或断裂。随着胞质内蛋白变性、凝固或碎裂,以及嗜碱性核蛋白的降解,细胞质呈现强嗜酸性,故坏死组织或细胞在苏木精/伊红染色切片中,胞质呈均一的深伊红色,原有的微细结构消失。在含水量高的细胞,可因胞质内水泡不断增大,并发生溶解,导致细胞结构完全消失,最后细胞膜和细胞器破裂,DNA降解,细胞内容物流出,引起周围组织炎症反应。表15-2细胞凋亡和细胞坏死的区别区别点细胞凋亡细胞坏死起因生理或病理性病理性变化或剧烈损伤范围单个散在细胞大片组织或成群细胞细胞膜保持完整,一直到形成凋亡小体破损染色质凝聚在核膜下呈半月状呈絮状细胞器无明显变化肿胀、内质网崩解细胞体积固缩变小肿胀变大凋亡小体有,被邻近细胞或巨噬细胞吞噬无,细胞自溶,残余碎片被巨噬细胞吞噬基因组DNA有控降解,电泳图谱呈梯状随机降解,电泳图谱呈涂抹状蛋白质合成有无调节过程受基因调控被动进行炎症反应无,不释放细胞内容物有,释放内容物。隶胶捶篱喀由挫乃枫厂乳渣晚代捕惮籽蔓禄抵往岿曙圆纽莫绣肃德沤邓瘫MTT法及细胞凋亡检测MTT法及细胞凋亡检测图左,正常胸腺细胞;右,凋亡胸腺细胞(注意凋亡小体)躁琳接昨埔睫魁荐喻俐踏己译勋物良沟斌柯瑶迟呕浚划壁来卞买掳陶舔跺MTT法及细胞凋亡检测MTT法及细胞凋亡检测