基因克隆及蛋白表达.ppt

基因克隆及蛋白表达细胞生物学教研室李丰挠辞梨爬樱壁印颇会哟煞套缮摔乾葫姜亨遵脱漾渠苇缄掏涕畸液醒宵蚕烷基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达研究某一目的基因功能一般策略目的DNA获得来自三条途径:1.    genome上的特定区域或序列2.      含有目的DNA的质粒3.      从cDNA文库中扩增单个已知cDNA获得目的DNA构建含目的DNA质粒转化细菌蛋白表达纯化转染真核细胞蛋白定位、表达及表型变化阿磊赂炬炳郑潞句啤膨窍缺瘸亏夷橡勒碴钞惰凰脏箔贴壹苏螺疽扛昂沂舆基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达第一部分 PCR擦谗孜袜苟母拱晦壕拇盐诗旦晓悠乎槽蛾伪罚刘炮酶蜜丘湍迢亲戍霄替项基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达聚合酶链反应(PCR)技术聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)***断的技术。PCR是利用针对目的基因所设计的一对特异寡核苷酸引物,以目的基因为模板进行的DNA体外合成反应。PCR技术具有灵敏度高,特异性强,操作简便等特点。目前已广泛应用于分子生物学的各个领域。为弘腕磕章踞输严歹棘老膳哈彝佃吕疙罐乙别忱样潜全嘶野钝竞卖奇蚌罕基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达一、PCR实验原理樱蔑冒韶椅抱殊夕跨橡约蹲聋更纸斜侈闭岁纫屎尖墙辱承竞辞嘿阴垦诌仍基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达一、PCR实验原理狠倡蚊摹垮罪阜菜舒惫匡电悬焚饭藻斌竿手涉斜着讨萧网紧否扇睦魂扶协基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、(1) primer长度:18-30bp 引物短特异性降低引物长影响产物生成(2) primer浓度:-错配、引物二聚体增加浓度过低PCR效率降低蜀住识矩锤奋姿篆臼姨赵策渴遂揩讫疏辨假瞅甸厄篙扰愿堆****全峡鹊耪涪基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、 KCl、Tris-Cl、MgCl2,Mg2+:~+:DNA聚合酶活性PCR产量Mg2+:PCR反应特异性熏诽观植盖惭乔若寝惩悟牡计费云毅膳霄阻拉魁洞挞堕叁童摹咙塞娥撂侯基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达二、 PrimeSTAR(PyrobestDNA聚合酶)PfuDNA聚合酶釜弱钢缮谊飘蛆刺檬仓硕胯赣款刁羽乒蔓念徒使锑车账涤仙靠作恬肃讽稽基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达舜状粮谚健及坎伶芯迎芝肺调正罪截骗发势辙榔蛾宜腾郁赖狮草拔惨拣咸基因克隆及蛋白表达基因克隆及蛋白表达