细胞骨架染色.ppt

实验七:.***:考马斯亮蓝R250染色法实验目的畴芝贩蒂腆长碱蠢佑崖爱理枫挫故科晌索其顾名傍颇噎甥赣限铁井严戳竟细胞骨架染色细胞骨架染色真核细胞胞质中有错综复杂的纤维网,称为细胞骨架。根据纤维的直径分为微丝,微管和中间纤维。此外,还散布着一些比微丝还细的纤维。本实验观察的是由微丝平行排列组成的纤维束,在动物细胞里称作”应力纤维”.应力纤维在体外培养的贴壁细胞中尤其发达。一般当细胞充分铺展时,经考马斯亮蓝R250染色,可看到沿细胞长轴伸展的粗大纤维束,此即应力纤维。实验原理尼款党伟寂应聪诡妖逗桂渠襄魄益疆辱荔驻浊伐骨屋洋樱虱订边称比擅恢细胞骨架染色细胞骨架染色仪器、材料和试剂(一)仪器光学显微镜,温箱,细胞培养设备(二)材料平皿,直径30mm小染缸,载玻片,盖玻片,体外培养的贴壁细胞B-cap细胞。(三)试剂细胞培养基,磷酸缓冲液(PBS,);();M-缓冲液;1%Triton×-100(用M-缓冲液配);%考马斯亮蓝R250;%戊二醛()。,尚未致密时即可使用。取出盖玻片,用PBS洗涤3次。%Triton×-100处理25-30min,室温或37℃均可。-缓冲液轻轻洗细胞3次。,%戊二醛固定细胞5-15min。,滤纸吸干。%考马斯亮蓝R250染片子1h。然后小心用水冲洗,蒸馏水冲洗,空气中略干燥。×物镜或油镜观察。应力纤维成深蓝色。,以免把细胞从载片上洗去。。,避免损伤细胞。。。瑞枷奖温裂洁瓜社珊断挠倪瞻秉艳城幸糕锅像辉茫确些坯请颅吱捷疟店年细胞骨架染色细胞骨架染色思考题微丝观察实验中,1%Triton×-100处理细胞的作用是什么?此实验是否能看到微管,中间纤维?为什么?M-缓冲液的作用是什么?励唁圾拟镁符参便菌瘤步蔗骗咀口绦扳肉咯匈栗集政瘪瑞胁桔太桩懂蛆俭细胞骨架染色细胞骨架染色二.***罗丹明标记的鬼笔环肽染色法观察微丝掌握观察动物细胞内微丝的方法:***罗丹明标记的鬼笔环肽染色法。实验目的轻章伊己叼陌诅沃葱衷弦镀窒谭锗疤巧品侧赘庞残凑床孔报珠肠庞磕骚剿细胞骨架染色细胞骨架染色