重组结核分枝杆菌Mr 38 000蛋白的表达、纯化和鉴定.doc

重组结核分枝杆菌Mr38000蛋白的表达、纯化和鉴定摘要从H37Rv基因组中扩增Mr38000蛋白基因并高效表达和纯化。用PCR技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Mr38000蛋白序列,将其与pGEM-T-,构建重组克隆载体pGEM-T-Easy/Mr38000,测序正确后将目的基因片断克隆入pQE-,IPTG诱导目的蛋白表达。经Western-blot鉴定目的基因与(His)6融合表达,将已表达的蛋白质通过Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化。PCR得到结核分枝杆菌Mr38000蛋白基因,测序结果与GeBank中报道的完全一致。SDS-PAGE显示,×103处有相应的蛋白质表达条带,Wesernblot鉴定为(His)6融合表达蛋白。经Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化后可得到纯化的蛋白。成功克隆了铁调节蛋白基因Mr38000蛋白序列,,亲和层析后获得了纯化目的蛋白。关键词Mr38000蛋白;表达;纯化;结核分枝杆菌;Cloning,ExpressionandPurificationofMr38000proteinfromMycobacteriumtuberculosisZHANGMing,LIJin-cheng,LINHang(Departmentofinternalneurology,,theFuZhougeneralhospital,FuZhou,350025,)[Abstract]ToobtainMycobacteriumtuberculosisMr38000proteinfromH37Rv-DNA,-T-,binatedexpressionvectorpQE-80Lbyrestrictionenzymedigestion,namedpQE-80L--80L--PAGEandconfirmedbywesternblotwithmice-specificmAbagainst(His)-80L-,whichcouldbecaughtby(His)-