LC3000现场培训教程资料.ppt

一、色谱技术回顾色谱的起源(色谱法是什么?)色谱法最早出现,是俄国植物学家Tswett于1903年在波兰华沙大学研究植物的叶子组成时,用碳酸钙作为吸附剂,分离植物干燥叶子的石油醚萃取物;植物的色素吸附在管内的碳酸钙里,再用纯净的石油醚洗脱被吸附的色素,于是管内的碳酸钙上形成了三种颜色的6个色带。当时,Tswett把这种色带叫做“色谱”,其英文译名为Chromatography。这一方法中的碳酸钙成为“固定相”,而纯净的石油醚被称为“流动相”。Tswett的方法就成为液固色谱(Liquid-SolidChromatography)。TewettM,BerDtschBotGes,1906;24:、色谱技术回顾二、高效液相色谱法及色谱基本语言三、培训设备四、溶剂准备五、LC3000色谱仪组成六、LC3000系统基本操作七、HPLC维护知识分离结果流动相固定相起源Tewett1903色谱技术回顾回顾色谱法的原理图形化解释色谱法 100米短跑8位选手位于起跑线上开始:(样品溶液在进样阀))跑道阻力,空气阻力:(色谱柱)肌肉动力:(输液泵)拍照和终点线:(检测器)秒表:(工作站)色谱分离的机理★★色谱分离是一个物理的过程流动相(MobilePhase)固定相(StationaryPhase)样品(溶解于流动相中的溶质)色谱技术回顾色谱技术回顾色谱法是什么?色谱法是利用不同性质的物质在不相混溶的两相中分配系数,吸附解吸附或其它性能不同而被分离。回顾常规分类方法按流动相的物态分:–气相色谱(GasChromatography,GC)用气体作为流动相(又叫载气)–液相色谱(LiquidChromatography,LC)用液体作为流动相(又叫洗脱剂)-超临界流体色谱(是指使用条件,超过了流动相的临界温度和压力,以CO2为代表)按固定相的形态分:–平面色谱􀂃纸色谱􀂃薄层色谱–柱色谱按流动相和固定相的相对极性分:–正相色谱(NormalPhaseChromatography)􀂃固定相的极性大于流动相–反相色谱(ReversedPhaseChromatography)􀂃固定相的极性小于流动相反相色谱最常用的流动相及其洗脱强度:水<甲醇<乙***<乙醇<丙醇<异丙醇<四氢呋喃最常用的流动相组成“甲醇-水;乙***-水”正相色谱最常用的流动相及其洗脱强度:正己烷<***<乙酸乙酯<异丙醇**应用添加剂,成为离子对、离子抑制方法回顾按分离过程的机理分:–吸附色谱(AbsorptionChromatography)􀂃根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离–分配色谱(PartitionChromatography)􀂃分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同–离子交换色谱(IonExchangeChromatography)􀂃根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简称离子色谱(IC)–体积排除色谱(SizeExclusionChromatography)􀂃GPC(GelPermeationChromatography)凝胶渗透色谱法–固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂􀂃GFC(GelFiltrationChromatography)凝胶过滤色谱法–固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液什么是高效液相色谱HighPerformanceLiquidChromatography高效液相色谱法,简称:HPLC是一种区别于经典液相色谱;基于仪器方法的高效能分离手段:高性能的色谱柱,高精度、耐高压的输液泵以及高灵敏度的检测器……广泛应用于各个领域:医药/环保/石化/生命科学/食品及农业……二、高效液相色谱与经典液相色谱(柱色谱)比较高效液相色谱