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QLFATINSTL(93102aa)是隐球菌抗原MP98 CTL优势表位
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:谷明莉,邓安梅,周晔,陈燕,陈波,仲人前,温海,陈孙孝
【摘要】目的鉴定隐球菌抗原MP98中的HLAA*0201限制性CD8+CTL表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测隐球菌MP98中可能存在的HLAA*0201限制性CD8+CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLAA*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定MP98的HLAA*0201限制性CD8+CTL表位。结果位于MP98氨基酸序列肽3(93102aa)与HLAA*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLAA*0201阳性个体PBMC增殖,并诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽3 QLFATINSTL(93102aa)是抗原MP98上HLAA*0201限制性CD8+CTL的优势表位,可作为隐球菌疫苗设计的候选表位。
【关键词】隐球菌;细胞毒性T细胞;抗原表位
Abstract: Objective To identify HLA
A*0201 restricted CD8+CTL epitopes in us neoformans Firstly, database SYFPEITHI was applied to predict HLAA*0201 restricted CD8+CTL epitopes in us neoformans MP98. Secondly, affinity and stability of the predicted peptides with T2 cell were assayed by FACS. Thirdly, cells proliferation and cytotoxicity induced by peptides were investigated by DELFIA cell proliferation assay and DELFIA EUTDA cytotoxicity test, respectively. Results Peptide 3 (QLFATINSTL, 93102aa) had high affinity to HLAA*0201 molecules, and stimulated PBMCs in healthy donors to proliferate and induce antigen specific CTLs. Only peptide 6 could give a positive proliferation response and specific cytotoxicity. Conclusion Peptide 3 (QLFATINSTL, 93102aa) is the HLAA*0201 restricted CD8+CTL epitope of us neoformans MP98, which shows that it can be the candidate for peptidebased ine.
Key words: us neoformans; epitope; cytotoxic T lymphocyte
近年来,隐球菌性脑膜炎的发病率呈明显上升趋势。尤易伴发于HIV/AIDS等免疫缺陷患者。该病治疗困难,治愈率低,已成为这类人群致死的主要原因之一[1~2]。在隐球菌感染的人群中只有免疫力功能较为低下的个体才易于发病,而在机体隐球菌感染中越来越多的研究表明,特异性细胞免疫发挥着重要作用。因此,开发研制新的预防和治疗隐球菌的疫苗,具有重要意义和广泛的应用前景[3]。HLA
A*0201在多数人群中普遍存在,其频率40%,进行HLAA*0201限制性CTL表位的研究将更具有现实意义。

本课题利用生物信息学数据库对隐球菌抗原MP98[4]中可能存在的HLAA*0201限制性CD8+CTL表位进行初步预测,然后进行抗原肽HLA分子亲合力和稳定性分析,采用时间分辨荧光法(DELIFA)对抗原肽诱导的细胞增殖反应、CTL细胞毒活性进行研究,逐步鉴定出QLFATINSTL(93102aa)是隐球菌抗原MP98 CTL优势表位。
1 材料和方法
研究对象 10例HLAA*0201阳性健康志愿者,10例HLAA*0201阴性健康志愿者