白藜芦醇对肝癌Bel7404细胞增殖、凋亡及侵袭的影响.doc

白藜芦醇对肝癌Bel7404细胞增殖、凋亡及侵袭的影响
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【摘要】目的研究白藜芦醇对肝癌Bel7404细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法MTT法和增殖细胞核抗原(PCNA)测定法检测白藜芦醇对Bel7404细胞增殖的影响;流式细胞术和TdT酶介导的dUTP缺口末端标记法检测白藜芦醇对Bel7404细胞凋亡的影响;黏附实验、运动实验和侵袭实验检测白藜芦醇对Bel7404细胞侵袭能力的影响。结果白藜芦醇浓度25 μmol/L可抑制肝癌细胞Bel7404增殖,并诱导凋亡();浓度100 μmol/L正常肝细胞L02的增殖也受到抑制,并产生凋亡()。25,50 μmol/L的白藜芦醇可抑制Bel7404细胞黏附细胞外基质纤连蛋白(FN)及降解基质的能力(),对该细胞的运动能力无明显抑制作用。结论一定浓度的白藜芦醇可抑制肝癌Bel7404细胞增殖,诱导其凋亡,并可能通过抑制Bel7404细胞与细胞外基质FN的黏附及对基质的降解来抑制Bel7404细胞的侵袭能力;在较高浓度下(≥100 μmol/L),白藜芦醇对正常肝细胞株也产生抑制增殖和诱导凋亡的毒性作用。
【关键词】藜芦生物碱类癌肝细胞肝肿瘤细胞增殖细胞凋亡肿瘤侵润
自从葡萄酒中发现白藜芦醇以来,人们陆续发现它具有保护心肌细胞、改善微循环、抑制血小板聚集、抗内***休克、降血脂、抗脂质过氧化、镇咳、平喘、抗病原微生物及抗老年痴呆等众多生理功能。近年来又发现白藜芦醇具有抗肿瘤功能,表现为对某些肿瘤的起始、促进、进展3个阶段均有抑制作用[1]。白藜芦醇并非对所有肿瘤都有抑制作用,而且其抗肿瘤机制目前尚不明确。肝癌为我国最常见的恶性肿瘤之一,是重要的抗肿瘤研究对象。笔者从肿瘤细胞增殖、凋亡及侵袭方面探讨白藜芦醇的抗肝癌细胞株机制,以及对正常肝细胞的毒性作用。
1材料与方法

7404及正常肝细胞L02均由福建省肝胆外科研究所提供;白藜芦醇由福建师范大学生物工程学院提纯生产(%);RPMI 1640和DMEM培养基(美国Gibco公司);噻唑蓝(thiazolylblue,MTT)、胰蛋白酶(北京华美生物科技有限公司);PCNA试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司);TUNEL试剂盒(美国Premega公司);Transwell小室(美国Corning公司);纤连蛋白(FN)和基底膜基质凝胶Matrigel(美国BD公司)。
7404在含10%小牛血清的RPMI 1640中、L02在含10%小牛血清的DMEM中培养,当细胞生长达到80%融和时,取处于对数生长期的细胞用于实验。实验均分为2组;对照组不加白藜芦醇,处理组中加入不同浓度的白藜芦醇。
(1)%胰蛋白酶将细胞消化制成2
×105 mL1单细胞悬液,按每孔100 μL接种于96孔板,,25,50,100,200 μmol/L,分别在12,24,48 h各取1块板,换不含血清的培养液每孔100 μL,各孔中加MTT 10 μL(5 mg/mL),孵育4 h,加