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【实验报告】血液凝固及其影响因素实验五:血液凝固及其影响因素实验人:同组人:【实验目的】学****血液凝固的基本过程了解加速或延缓血液凝固的一些因素【实验原理】血液凝固是一个酶的有限水解激活过程,在此过程中有多种凝血因子参与。根据凝血过程起动时激活因子来源不同,可将血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。内源性激活途径是指参与血液凝固的所有凝血因子在血浆中,外源性激活途径是指受损的组织中的组织因子进入血管后,与血管内的凝血因子共同作用而启动的激活过程。【实验材料和用具】家兔清洁小试管7个、小烧杯2个、竹签、秒表、试管架、哺乳动物手术器械一套、兔手术台、动脉夹、塑料动脉插管、线、棉花、水浴槽、冰盒液状石蜡、肝素、草酸钾1~2mg、、生理盐水【实验过程】动物麻醉及颈部手术(此部由助教老师操作)取一只动物,称重。按1g/kg体重的剂量将乌拉坦(氨基甲酸乙酯)由耳缘静脉缓慢注入,观察动物肌张力、呼吸与角膜反射的变化。动物麻醉后背位固定于兔手术台上。剪去颈部手术野的毛,沿颈正中线在喉头上一指至锁骨上一指的地方作一5~7cm的皮肤切口。分离皮下组织及肌肉。颈总动脉插管(此部由助教老师操作)在气管两侧辨别并分离颈总动脉,颈总动脉下方穿两条线备用。在左侧颈总动脉的近心端夹一动脉夹,在动脉夹远心端距动脉夹约3cm处结扎。用小剪刀在结扎线的近侧(结扎线与动脉夹之间)沿向心方向剪一小斜口(约占管径的一半),向心脏方向插入动脉插管,由备用的线结扎固定。取血时将动脉夹松开即可。血液凝固的加速和延缓观察打开兔颈总动脉夹,血液从动脉插管流出,弃去第一份1mL动脉血后,向每个试管中注入1mL兔动脉血,并摇匀。自血液流出动脉插管开始计时。除第1管外,其他各管每隔15秒钟将试管倾斜一次,观察液面是否倾斜即血液是否流动,直到试管内血液不再流动为止,记录凝血时间。当第2管已经凝固时,再倾斜第1管看血液是否凝固,若尚未凝固则按上述方法每隔15秒钟倾斜一次,直到血液凝固为止,记录凝血时间,即为该兔血的凝固时间。以第2管为对照,各管观察其他各管中血液凝固时间。向第9管中滴加2%***化钙2滴,观察血液是否凝固。取出第5管中的玻棒,用水洗净,观察附着在玻棒上的纤维蛋白。注意事项:取放试管时要用拇指和食指捏住试管的上端,不要握住试管的底部,以免手的温度影响结果。每支试管口径及采血量要尽量一致,不可相差太大。记录凝血时间要准确。判断凝血的标准要前后一致。一般以倾斜试管达45°时,试管内血液不见流动为准。【实验结果及相关讨论】管号实验条件凝血时间(一组)凝血时间(二组)%(6滴)大于20min大于20min肝素是抗凝剂,能不可逆的阻止血液凝固。由于肝素钠具有带强负电荷的理化特性,能干扰血凝过程的许多环节,在体内外都有抗凝血作用。其作用机制比较复杂,主要通过与抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)结合,而增强后者对活化的Ⅱa、Ⅸa、Ⅹa、Ⅺa和Ⅻa凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破坏,妨碍凝血激活酶的形成;阻止凝血酶原变为凝血酶;抑制凝血酶,从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。中和组织凝血活素(因子Ⅲ)。抑制血小板的聚集和释放。它对血中有机成分和无机成分的测定均无影响。2加入2%(6滴)大于20min血液凝固的多个环节中都需要钙离子的参与,故通常用枸橼酸钠、草酸钠和草酸钾作为体外抗凝剂,它们可与钙离子结合而除去血浆中的钙离子,从而起到抗凝作用。理论上当继续向血液中加入CaCl2溶液,CaCl2中的钙离子会起到凝血因子IV的作用,从而使再次启动凝血过程,血液凝固。草酸盐是可逆性抗凝剂。但本次实验中加入CaCl2后并没有出现凝血现象,可能是CaCl2溶液配置有问题,或者由于操作不当,凝血因子已经完全失活。3室温(6滴生理盐水)静置7min30s7min30s血液流出血管后,很快会凝固。血液流出血管后血小板4室温(6滴生理盐水)每隔15S倾斜45°4min5min倾斜可加速血小板的粘附聚集过程,并加大血小板释放的凝血因子与血细胞的接触面积,从而加快了凝血的过程。该过程是内源性凝血过程。5细玻璃粉少许(6滴生理盐水)2min45s3min玻璃粉是异物,可激活凝血因子Ⅶ及血小板,启动凝血过程。6脑组织浸出液(6滴)15s30s脑组织液中有组织因子途径抑制物,是外源性凝血途径的特异性抑制剂,因而能加速凝血过程。7置于40℃水浴(6滴生理盐水)165s165s适当升高温度,能增加酶的活性,加快凝血过程。8置于10℃水浴(6滴生理盐水)大于20min降低温度可以降低酶的活性,延缓凝血过程。9竹签搅拌(6滴生理盐水)有富有弹性的纤维蛋白纠缠在竹签上同上在竹签的搅动下,特别是缠上线的接触面粗糙的竹签,能加速凝血过程,使凝血因子按一定顺序相