CHAPTER 2 DNA凝胶电泳.ppt

Chapter 2
DNA 凝胶电泳
Chapter 2 DNA凝胶电泳
用于分离、鉴定和纯化DNA片段
主要有:
琼脂糖凝胶电泳:分离范围大50-百万bp DNA均可分离。水平方位、恒定强度和方向的电场。
聚丙烯酰胺凝胶电泳:适合分离小片段DNA(5-500bp),制备比较复杂,垂直方位进行。
脉冲场电泳:两个电场交互,电场方向有一定角度,可以分离非常大的片段。
1 kb
kb
2 kb
3 kb
4 kb
Agarose (琼脂糖):
a much less resolving power than polyacrylamide,
but can separate DNA molecules of up to tens of kb
Polyacrylamide
has high resolving capability, and can resolve DNA/RNA that differ from each other as little as a single base pair/nucleotide.
but can separate DNA over a narrow size range (up to a few hundred bp/nt).
pulsed-field gel electrophoresis
Switching between two orientations: the larger the DNA is, the longer it takes to reorient
1. 琼脂糖凝胶电泳
DNA在琼脂糖凝胶中的迁移速率受以下因素影响:
DNA分子的大小:分子越大,迁移速率越慢
琼脂糖的浓度:浓度不同,迁移速率不同
DNA的构象:超螺旋、切口环状、线状
凝胶和电泳缓冲液中的溴化乙锭
所用的电压:5-8V/cm
琼脂糖种类:标准、低熔点琼脂糖
电泳缓冲液:组成和离子强度
琼脂糖凝胶电泳(电泳缓冲液)
琼脂糖凝胶电泳(载样缓冲液)
琼脂糖凝胶电泳(仪器设备)
电泳槽
电泳仪
1. 配制足量的电泳缓冲液,用以灌满电泳槽和配制凝胶。
2. 根据欲分离DNA片段大小用电泳缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖溶液:准确称量琼脂糖干粉加到盛有定好量的电泳缓冲液的三角瓶中。
3. 在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖熔化。
4. 转移三角瓶冷却到55℃左右,加入溴化乙锭, ,轻轻混匀。
琼脂糖凝胶电泳(方法)