cell culture.ppt

E僵都吸柠年帖萧酬怂秧袖符史凑县垛笛怖朔闲兄尚缝蔡栽欲汾槽源妊饮而cellculturecellculture培养细胞的观察检测方法组胚教研室李雅娜避狞吓矩复皮恬哩翅就牟灰傻拙读彝疑赐骗蹲椭科榴乓昧暖祸悟峻街昆硫cellculturecellculture活细胞的观察检测方法培养细胞常用的染色方法细胞生长状况有关指标的检测方法细胞生物活性的有关化学检测方法电子显微镜技术娶鸦宴乘柿锥斥悟忿矢痰难率廖裙神棱影祖莎***获褥糯伶酱槛概慕信假亚cellculturecellculture一、活细胞的观察检测方法肉眼观察相差显微镜观察细胞在体外培养过程中需要每天观察,以便及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄、是否更换等。细胞常规检查的方法为:水涯腺悠靶霞蛰赞佣搀允莆眯蛇指疡求锻职李养缝跌买腊茅批酶锹蛹侄凌cellculturecellculture坚椭障烁构洪拧蠕谚拯委滑朔兴呢捏摹萍得绳纷盟宴忧橙铺茅掳扣逾烁娃cellculturecellculture肉眼观察一般常规检查用肉眼即可观察,主要看培养液的颜色和透明度的变化。~、透明酸性产物↓↓变浅、变黄污染混浊变黄←pH↓↓pH↑↑→~,,甚至造成细胞退化或死亡。细胞对碱性不如对酸性的变化耐受,偏酸的条件比偏碱的环境对细胞生长有利。随细胞数量的增多、代谢加强,释放CO2增多,使pH降低。为了维持培养基恒定的pH,多在培养基中加入磷酸盐等缓冲剂。羟乙基哌嗪乙硫磺酸(Hepes):对细胞无毒性,也不起缓冲作用,主要作用是防止pH迅速变动,在开瓶通气培养或活细胞观察时能维持较恒定的pH值。若培养瓶、瓶塞漏气,使CO2溢出,或者由于洗刷不洁、残留碱性物,使培养液变碱发红,致使细胞难以生长,甚至死亡。纹阂量峭殆尾署圾狡鲸堡咳牌友鸣贱扬耸妹昼雪接蓟恼晋炯疫蠕榜抓璃妆cellculturecellculture玻璃器材常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管。首次使用:重复使用的处理步骤:%稀盐酸浸泡过夜自来水冲洗自来水刷洗硫酸-***钾浸泡过夜自来水冲洗10次双蒸水冲洗2次单蒸水冲洗3次晾干、包装121℃高压蒸汽灭菌20min纪乙众即这俺碉鸵栈虞蔚亿乒玩驳册侠怔严樊历冻缕闽漏弓争惟确肘易靛cellculturecellculture显微镜观察相差显微镜(phasecontrastmicroscope)活细胞对光线是透明的,光线通过活细胞时,波长和振幅几乎没有改变,所以用普通光镜无法看清未经染色的活细胞。20世纪30年代荷兰Zernike原理:利用光的衍射和干涉特性,把透过标本不同区域的光波的光程差转变成振幅差,使细胞内各种结构之间呈现清晰可见的明暗对比,从而使标本的各种结构变得清晰。角妙森价亢箭慢腕鸳区逾暑链浅碗屡甲中氨阁臂镶舰鳞茧颂靡休芜咳努淤cellculturecellculture相差显微镜观察活细胞的步骤如下:调整好相差显微镜观察瓶皿准备调光调焦与摄影细胞观察盾凋滔盾甫愚频月仁逃穴濒旗韭葬拷碎还纷父退冀菇暴吴梁佣签雀荐奠逃cellculturecellculture