化实验心得体会.doc

2014年春季学期生化实验总结及心得体会刘乐乐20**********山东大学生命学院2011级生物技术班去年春季学期于中山大学交流,未修生物化学实验,本学期跟随2012级学弟学妹一起学****生物化学实验,在曲老师和李老师的指导下,完成了费林试剂热滴定定糖在内的十余个实验,收获颇丰,特于课程结课知己,总结并分享一下本学期的生化实验体会。实验回顾本学期先后完成费林试剂热滴定定糖、氨基酸薄膜层析、3,5-二硝基水杨酸法测还原糖、紫外吸收法测定蛋白含量、电泳分离血清蛋白、酵母核糖核酸提取、Folin酚法测蛋白含量、纤维素酶活力测定、核酸浓度测定、唾液淀粉酶最适ph的选择、肌糖原酵解、凯氏定氮等十二个实验,另有一次实验室安全教育和实验总结。表格1本学期内容回顾总结类别(糖/蛋白质/核酸/酶)方法(分光光度/标准曲线/滴定)原理或试剂备注费林试剂热滴定定糖糖(面粉,总糖)定量滴定、葡萄糖标准曲线碘液费林试剂经典方法氨基酸薄膜层析蛋白质(氨基酸)定性、分离鉴定层析聚酰***薄膜DNS-***溶液显色,紫外荧光丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸3,5-二硝基水杨酸法测还原糖糖(西瓜汁)540nm吸光度、葡萄糖标准曲线3,5-二硝基水杨酸(DNS)紫外吸收法测定蛋白含量蛋白质(血清)280nm吸光度、酪蛋白标准曲线电泳分离血清蛋白蛋白质(血清)定性电泳醋酸纤维薄膜搭桥电泳染色漂洗透明淋洗干燥疾病诊断酵母核糖核酸提取核酸(RNA)提取碱法,沉淀Folin酚法测蛋白含量蛋白质(血清)定量640nm吸光度酪蛋白标准曲线Folin酚试剂纤维素酶活力测定糖(纤维素酶+羧***纤维素钠540nm吸光度、葡萄糖标准曲线DNS酶活单位的定义核酸浓度测定核酸(RNA)定量260nm吸光度标准曲线唾液淀粉酶最适ph的选择糖(唾液淀粉酶+淀粉)显色反应碘液控制时间设计思路肌糖原酵解糖(酵解酶系)定性显色反应对羟基联苯凯氏定氮蛋白质(牛奶)定量滴定蒸馏定氮测定蛋白含量是其他方法的标准实验总结分光光度计分光光度计是生化实验重要的仪器。72型分光光度计是可见光分光光度计,波长范围为420nm~700nm,它由三大部分组成:磁饱和稳压器、光源、单色光器和测光机构、微电计。它的基本依据是朗伯—比耳定律,它是根据相对测量原理工作的,即先选定某一溶剂作为标准溶液,设定其透光率为100%,被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的,即让单色光分别通过被测试样和标准溶液,二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。分光光度计测的是溶液的总体吸光度,而待测溶液中除了待测物质外还有其他的一些杂质等,会给实验带来一定的误差,,确保吸光度的差异仅仅是由于溶液中待测物质浓度的不同而引起的。因此要做空白对照。使用前要注意预热,石英杯不可混用,非工作时间可讲外盖打开。标准曲线标准曲线一定要用坐标纸,要使点均匀分布在直线两边(如果是向性关系的话);也可以借助回归线方程借助计算机作拟合曲线,并对曲线进行评估。滴定与移液管的使用这都是有机实验、生化实验重要的基础操作,要抓住机会好好练****实验方案的设计生化实验要从实验目的出发,确定实验原理及方法,选好实验材料。能力提升要诚实这是首要的,实验数据不理想,原因是多方面的,有时间的可以探讨原因并继续设计实验验证。我们现在所做的实验,都是实