重组人血管内皮生长因子d诱导鸡胚尿囊膜血管增生.doc

重组人血管内皮生长因子D诱导鸡胚尿囊膜血管增生    作者:陈浩丁秀云高媛柳晓兰高建恩孙启鸿    【摘要】为了表达和纯化具有生物学活性的人血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)?D,探讨VEGF?D对血管增生作用,从人胎肺组织中提取总RNA,设计特异性引物并应用RT?PCR法扩增VEGF?D成熟肽片段;经测序证明目的片段序列正确后,构建重组表达质粒pGEX?5X?1/VEGF?D并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行GST?VEGF?D融合蛋白的表达。结果表明,融合蛋白的分子量约为38kD,表达量占菌体总蛋白的15%以上,抗GST和抗VEGF?D的抗体均能识别融合蛋白;纯化的GST?VEGF?D融合蛋白与VEGFR?3/Fc具有结合活性,并能刺激红白血病细胞系HEL细胞生长;在鸡胚尿囊膜实验中GST?VEGF?D具有促进鸡胚尿囊膜血管生成的作用。结论:成功表达了具有生物学活性的重组人VEGF?D融合蛋白,为进一步研究VEGF?D的作用机理提供了实验模型。    【关键词】血管内皮生长因子D;血管内皮生长因子受体3;鸡胚尿囊膜;血管生成 binantHumanVEGF?DInducestheAngiogenesisoftheChickEmbryoChorioallantoicMembrane    Abstract    Vascularendothelialgrowthfactor?D(VEGF?D)andvascularendothelialgrowthfactorreceptor?2,?3(VEGFR?2,?3)?VEGF?Dfusionprotein,andtoexploretheangiogenesiseffectofVEGF?,andthematureformofVEGF?Dwasexpandedbypolymerasechainreaction(PCR),thentheplasmidpGEX?5X?1/VEGF?DwasreconstructedandtheGST?VEGF??%?GSTandanti?VEGF??VEGF?DfusionproteincouldinteractwithVEGFR?3/Fcandwasabletostimulatetheproliferationofhumanerythroleukemiacellline(HEL)