阿霉素中毒大鼠心肌肌浆网钙调节功能的变化.doc

阿霉素中毒大鼠心肌肌浆网钙调节功能的变化        中分类号:R73-361 文章标识码:A 文章编号:1000-7431(1999)06-0350-03 关键词: 阿霉素/中毒;心肌;肌浆网;钙阿霉素是一种高效抗肿瘤药物,然而它的临床应用因其心脏毒性作用受到极大限制。阿霉素的心脏毒性作用主要分为两类:,主要表现为房性或室性心律失常[1];,主要表现为阿霉素剂量依赖性心肌病;两者最终都可导致心力衰竭[2,3],但它们发生的机理不尽相同。急性者细胞核凝集成块,近核膜分布,大部分线粒体嵴断裂消失,形成空泡[4];而慢性者除有细胞核及线粒体变化外还存在严重的肌浆网水肿、空泡变等病理变化[5]。本研究是在上述基础上对阿霉素(Doxorubicin,DOX)急性、亚急性中毒心肌肌浆网(SR)钙调节功能进行研究,以期进一步探索DOX中毒机制,为临床合理应用DOX提供理论依据。材料与方法一、试剂 45Ca-CaCl2由中国原子能研究所(北京)提供,放射性比度50mci/gCa,;Na2-ATP、EGTA、HEPES、NaN3等为Sigma公司产品;阿霉素为意大利生产;其它试剂均为分析纯。二、阿霉素中毒大鼠心肌模型制备[4,5] Wistar雄性大白鼠25只,体重200g±20g,随机分为3组:对照组7只,尾静脉注射生理盐水;阿霉素急性中毒组(DOX1)9只,由尾静脉一次性注射阿霉素5mg/kg,于注射DOX后1小时取心脏检测;阿霉素亚急性中毒组(DOX2)9只,阿霉素按2mg/kg经尾静脉注射,每周1次,连续4周,末次注射后再隔1周解剖动物,取心肌检测。三、心肌SR的制备应用改良的JoneLR[6]法提取SR粗制膜,全部操作在4℃环境完成。快速取出心脏,去除结缔组织,称重后将心肌剪碎,加入5倍体积的A溶液(mmol/L:,,,蔗糖300,),匀浆后3000×g离心20min,取上清,14000×g离心20min,收集上清液于38000×g离心90min,弃上清,将沉淀悬浮于B溶液(mmol/L:蔗糖250,HEPES20,),考马斯亮蓝G-250染色法[7]测定SR膜的蛋白浓度后,置于-80℃保存。四、心肌SR摄取45Ca2+的测定用Millipore滤过技术测定SR的ATP依赖性45Ca2+摄取量。反应基质液为:(mmol/L)KCl120,HEPES20,,,Na2-,45Ca2+,。将20μgSR蛋白质与基质液预先在37℃温育90秒,-ATP启动SR对45Ca2+的摄取反应,而后于不同时间加入4℃终止液(mmol/L:KCl120,Tris100,,),,用终止液冲洗清除试管内和滤膜上未被SR囊泡摄取的残余钙。滤膜干燥后加入闪烁液,上机测定滤膜的放射活性。根据加ATP与不加ATP的滤膜放射活性之差计算特异性ATP依赖SR45Ca2+摄取量。每个样本均采用双管平行测定。五、心肌SR释放45Ca2+的测定取20μgSR蛋白质与反应基质液(同上)预先在37℃温育90