可见光分光光度计的操作方法.doc

可见光分光光度计的操作方法学时:2学时一、实验原理利用可见光等测定物质的吸收光谱,利用此光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法,称为分光光度法,使用的仪器是分光光度计。分光光度计灵敏度高,测定速度快,应用范围广,是生物化学研究中必不可少的基本手段之一。可见光光谱:光是电磁波,可用波长“λ”表示,电磁波谱是由不同性质的连续波长的光谱所组成,对于生物化学来说,最重要的波长区域是可见光和紫外光。光的波长是二个相邻的波峰之间的距离。λ=C/V 其中,λ-波长;C-光速;V-频率;单位时间要通过一个定点的波数。可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了可见辐射光后,发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱,反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。根据朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律:A=εbc,(A为吸光度,ε为摩尔吸光系数,b为液池厚度,c为溶液浓度)可以对溶液进行定量分析。ε越大,吸收光的能力越强,相应的分光光度法测定的灵敏度就越高。ε值越大,说明电子跃迁的几率越大,通常ε=10~105:一般认为ε>104为强吸收;ε=103~104为较强吸收;ε<102为弱吸收,此时分光光度法不灵敏。通常使用分光光度计可检测出的最小吸收度A=,所以b=1cm,ε=105时,可检测的溶液最小浓度是C=10-8mol/L。二、:340-1000nm波长精度:±2nm(360-600nm)表面刻度:(T)0-100%(A)0-,基本上都是由五部分组成:(1)光源;(2)单色器(包括产生平行光和把光引向检测器的光学系统);(3)样品室;(4)接受检测放大系统;(5)显示或记录器。三、实验试剂NaCl:1mol/lL、5mol/L;NaOH:1mol/lL、10mol/L;其他溶液。四、,打开样品池盖;,预热20min;测定透明材料的透射比      测定透明溶液的吸光度用标准曲线法对物质定量直接使用浓度直读功能直接使用浓度因子功能五、注意事项:1、仪器在运行中禁止将样品池盖长时间盖上,以防光电管疲劳;2、使用时必须把比色皿外面的液体用滤纸吸干,方可放入样品池架内;3、仪器使用完后,必须关闭电源,并将比色皿用高纯水冲洗干净,将外部的水用滤纸吸干后放入样品池架内待用。六、(波长为:550nm)溶液名程浓度透射比吸光度NaCl1mol/lL  5mol/L  NaOH1mol/lL  10mol/L  乙醇溶液95%(质量分数)  饱和N