醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白.doc

本次实验项目:实验二醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白本次实验课时:5学时教学要求:。。重点:滤纸桥的制做、薄膜的处理、点样难点:点样教学手段及教具:课堂讲授,学生实验操作。讲授内容及时间分配:………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………4学时参考资料《生物化学实验》  实验教学教案首页醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白(验证性):血清中含有多种蛋白质,它们之中有的和某些糖类结合,形成糖蛋白。人血清中蛋白质的等电点及相对分子质量蛋白质名称等电点(pI)相对分子质量/Mr白蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白γ-~~150000156000~300000   (二乙酸纤维素)薄膜具有匀一的泡沫状结构,渗透性强(厚度120微米),对分子移动无阻力,用它作区带电泳的支持物,可以很好的消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,具有用样量少(5μg的蛋白质可得到满意的分离效果),分离清晰,无吸附作用。醋酸纤维素薄膜经1,4-二氧六环、透明液或液体石蜡处理即透明,因而可得背景为无色的电泳图谱。:1,4-氨基-5-羟基-3-(对硝基苯偶氮)-6-(苯偶氮)-2,7-萘二磺酸二钠盐1,4-氨基-5-羟基-3-(对硝基苯偶氮)-6-(苯偶氮)-2,7-萘二磺酸二钠盐是酸性染料,其磺酸基与蛋白质反应构成复合盐。是最常用的蛋白质染料。带有负电荷的磺酸基,能与蛋白分子上带正电荷的侧链相结合。氨基黑分子含有较多的亲水基团,和蛋白质亲水微区有很大的亲和力。因此,以凝胶基质作为电泳支持物时由于亲水的凝胶基质与氨基黑有很大的亲和力,不容易漂洗,一般不使用它进行染色。―――:分为血细胞和血浆①血细胞:包括红细胞白细胞血小板(凝血)②血浆:是不含血细胞的。血浆中溶解着血纤蛋白原,它可转变成不溶性的血纤蛋白。③血清:、肾病综合征、肾功能衰竭时,清蛋白降低,α1、α2和β-球蛋白升高;慢性活动性肝炎、肝硬化时,清蛋白降低,β、γ-球蛋白升高;急性炎症时,α1、α2-球蛋白升高;慢性炎症时,清蛋白降低,α2、γ-球蛋白升高;红斑狼疮、类风湿关节炎时,清蛋白降低,γ-球蛋白显著升高;多发性骨髓瘤时,清蛋白降低,γ-球蛋白升高,于β和γ-球蛋白区带之间出现“M”带。一、实验目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。二、实验原理蛋白质是***电解质,在pH小于其等电点的溶液中,蛋白质为正离子,在电场中向阴极移动;在pH大于其等电点的溶液中,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质,它们所具有的可解离基不同,各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电