人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化分析.pdf

浙江大学硪士论文人骨髓问充质干细胞体外向表皮祥细胞分化的研究浙江大学医学院2006级硕士研究生导师外科学(烧伤)王素一韩春茂教授中文摘要皮肤移植是治疗大面积烧伤和糖尿病顽固性皮肤溃疡等皮肤缺损的主要手段之一。其皮源主要有自体皮、同种异体皮、异种皮及人工皮。自体皮是最理想的皮肤移植物,但对大面积烧伤患者来说,自体皮常常不足,而且自体供皮区疼痛易感染和瘢痕增生。同种异体皮和异种皮存在免疫原性而发生免疫排斥反应,仅能在受体成活3周左右,一般用来做大面积烧伤切、削痂后创面的临时覆盖物。而且有可能携带病毒易传播疾病。近几年,随着组织工程的兴起,人们认识到组织工程化皮肤具有能修复受损组织和可能替代部分组织功能的独特优势,各国都加大了对组织工程化皮肤的研发力度。在美国,组织工程化皮肤是FDA批准最早用于临床组织工程的产品,其代表产品有Dermagraft—TM,Dermagraft—Tc和Apligraf(TM)。但上述产品均以异体表皮细胞或/和异体成纤维细胞作为种子细胞,所以仍然是临时性覆盖物。真正的永久性存活组织工程化皮肤的开发不仅需要具有良好生物活性和相容性的支架,还需要具有功能的不被排斥的种子细胞。目前国内外对支架的研究已接近成熟,用PLA、PGA和胶原等材料和成纤维细胞构建的组织工程化真皮具有良好的生物相容性和促进伤口愈合的能力,但要成为商品的全层组织工程化皮肤关键还在于表皮成分的种子细胞。近几年随着干细胞研究是深入和分子生物学的进步,使得皮肤组织工程种子细胞的问题有了解决希望。组织工程化皮肤的种子细胞主要为表皮系细胞(包括角质形成细胞[Kc]/表皮干细胞[Ksc])和其他干细胞,包括胚胎干细胞(Es)和骨髓间充质干细胞(Msc)2囊江夫攀硬士论文等。自体KC/KSc做种子细胞则受自体皮不足的困扰,抖体Kc/KsC稃在免疫排斥反感,应曩都受剿了双剃。黔要从入旱期题骀(妊娠}2髑内)缎织获取功能细胞,但是飙怒滁获取缨慈渗及社会稔理学海繇,不藏宰圭会锈度、文纯背景瑟霹侩耀学的认识、理解不同,在不同国家有潜备自的相关嫩策法规,影响了胚胎的临臻应援。Msc嶷有取褪方蠖、免疫接斥夏巍小、溪臻拣力强、冥鑫多鹞分诧港鼹秘荔予矮源靛嫠霞静导天鬻装达等特点,不涉及稔瑗攀,是理怒靛褥子缁藏。Msc是一种具有多向分化潜能的细胞,在特定的条件下可向成骨细胞、成软嚣甥怼、瓤魅、月器醛缨瑰、露{l遘基质细腿、趣案翅友绒腿及辩经细魏群霸疆分化。溺充质于缨臆存在于多静缀缓中,掘嚣髓、嚣壤、聪艨、疫默、l簿勰和魏蠢等。媾中,骨髓Msc易于分离绷化,在体外麒宥极强的增髓能力,是目时组织工程剩翻辫塞合磅究中鬻蠲豹子细臆寒溧。嚣翦鸯髓疆se分离蟋葬方法营遮采潮豹是密度梯度分离法。近年来斡研究表疆***餐髓维藏还憝程体蠹努诧海藻能多释缀双中成熟的非造m细胞,如Msc已成功地蹴向诱导分化为中胚层细胞如成骨细胞?、耱骑爨憝埘、软蓉缨照翻积戴建缨毙“3等,还分纯力井疑瑶缨照耪缝缀驻83,说明醛%可跨题羼分纯。丽有关潲C南表皮缨臆分往晦瞬究凡乎帮愚在体露进行,幸毒小兵等把5一姗d标记的MSc氍体外扩增尉,回植入提供骨髓的香猪的皮内和皮下,发瑷毒5一&d翔性挺记缨腿璐璎在袤疲约瓣攫窝颓靛鼹,并表达角爨自蠲,初步认为旨髓闻充袋子细胞在体瓣具有分纯为袭皮缯藏的游麓。有实验袭瞬,雾赣麓骨髓移植给女性后,在女性爨钵表皮上缴现有Y/cytokeratin阳性绷胞”’“?.网夕}Ko曲ling镣取接受募缝翳髓移植麓女性受萍豹皮跤避嚣***检,鼹免疫组豫翻获光原位杂交獠溅发现畜4%弱14%的cytokeratin戮僚缓藏为￥黼性/焦蛋自隰性的细胞,遮熄细胞不表达cD45,但在闯一部位取树的表皮标本,袭皮细胞在体外壤莽下,寒发瑷骞￥粥性熬供体缎艇”’.珏erzog在研究孛发爨嚣髓来溪豹黼cs能迁移誉饿瓯透缘,然厝慢慢移至黼髓肉参与剖磷酶愈合?。赵誊华等季露BALB/c小鼠(臼琵)骨髓分离的干细胞输入致死量照射的c57BL/6小鼠(黑毛)40天爱,叠:受豁夺藏粒鹜上长岛了自毛。经受疫组拖帮Rl母鼹涯实受体,j、鬟疫获予细胞来源予供钵细貔8”。以上资睾耳说明挂sc向表皮系缨臆分佬完全可熊,位奁体外诱导MSC向畿皮细胞分化至今仍少见文献报道。浙江大学硕士论文研究目的体外分离、培养、扩增人骨髓间充质干细胞,用特殊的诱导培养基培养后,检测其是否表达表皮样细胞标记物,探索人骨髓问充质于细胞在体外向表皮样细胞分化的可能性,为今后的研究奠定基础。材料和方法取浙江大学医学院附属第一医院和第二医院检查无造血系统恶性疾病的***骨髓标本共8例。按改良的Pittenger方法““,分离骨髓标本,取单个核细胞培养传代。待细胞传代至第三代后,均分为对照组和实验组,分别用完全培养基和特殊的诱导液培养。完全培养基即L—DMEM+10%F