PC12细胞定性及定量测定神经生长因子活性的新方法.doc

PC12细胞定性及定量测定神经生长 因子活性的新方法*         提要对用PC12细胞培养测定神经生长因子活性的方法进行了探索,通过对几种培养条件的比较,找出了较为理想的能定性及定量测定神经生长因子的两种方法,为神经生长因子作为新药检测手段提供了一条新途径。关键词 PC12细胞神经生长因子活性测定ESTABLISHMENTOFNEWQUALITATIVEANDQUANTITATIVEBIOASSAYSFORNERVEGROWTHFACTORUSINGPC12PHEOCHROMOCYTOMACELLSDongYuewei XuTianrui** XiongYuliang XuKangsen***(YunnanInstituteforControlofDrugs Kunming650011) ABSTRACT Anewquantitativebioassayfornervegrowthfactor(NGF)hadbeendeveloped,,rapid,sensitiveandcanbeusedtocontrolthequalityofNGFproducts. KeyWords Nervegrowthfactor(NGF) PC12pheochromocytomacells Bioassay 神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)是一种对神经细胞生长发育、分化、新陈代谢等方面具有重要调控作用的活性多肽,作为药品在医学上有着广泛用途。该因子已从小鼠颌下腺,豚鼠、兔、牛前列腺,公牛精液,人胎盘和蛇毒等组织器官中分离纯化获得。作为药品质量检测,其生物活性测定方法主要有鸡胚背根神经节培养法和PC12细胞培养法两种。国内大都采用鸡胚背根神经节法,国外主要采用PC12细胞测定法[1~4]。后者不论是在灵敏度或是重现性方面都较前者有不可比拟的优越性,但实验条件要求高,需要可靠的细胞系等不足。在国外文献报道的基础上,特对采用PC12细胞培养测定NGF活性进行了研究,探索出了两种简便可靠,实验条件要求不高且较准确的定性与定量的新方法,为活性检测提供一种新的检测手段。1 试剂 PC12细胞[引自中国科学院典型培养物保藏委员会昆明细胞库(KCB93033YJ)];神经生长因子[从中华眼镜蛇毒(NajaNajaAtra)分离纯化获得,电泳纯度一条带,HPLC单峰];鼠尾胶原(取大白鼠尾巴的肌腱经乙酸提取制得);培养基(RPMI1640日本日水制药株式会社);马血清(美国生命技术公司,批号1009853);小牛血清(杭州四季清生物制品厂)。